RNA girişim gen fonksiyonu analiz etmek için çok etkili olduğu kanıtlanmıştır Drosophila Trakeal geliştirilmesi. Jiang laboratuarı tarafından demonte gen ekspresyonu sinek embriyolara dsRNA enjekte etmek için kullanılan ayrıntılı bir protokol gösterilmiştir. Bu teknik, doku ve organ gelişimi için gerekli tarama genler için bir potansiyele sahiptir Drosophila.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
DsRNA Enjeksiyon RNAi Girişim içine Drosophila Embriyolar
Bu makalede
Özet
Özet
Genetik tarama karmaşık biyolojik süreci 1 içgörüler kazanmak için mevcut olan en güçlü yöntemlerden biridir. Drosophila 2 yıl içinde genetik manipülasyon için birçok yenilik ve araçlar haline gelmiştir. Yakında çift iplikli RNA RNA enterferans (RNAi) Drosophila organ gelişimi gen fonksiyonlarını analiz için güçlü bir ters genetik yaklaşım sağlamak için gösterilen Caenorhabditis elegans, bireysel genlerin aktivitesi demonte etmek için kullanılabilir Frie ve Mello 3 tarafından ilk keşfinden sonra 4, 5.
, Akciğer, böbrek, karaciğer, ve damar sistemi de dahil olmak üzere birçok organı, dallı tübüler ağları oluşan taşıma hayati sıvı veya gazlar, 6, 7 . Drosophila trakeal oluşumu analiz tübüler diğer organların 8 morfolojilerinden çalışmak için mükemmel bir model sistemi sağlar. Berkeley Drosophila genom projesi, trakeal sistem olarak ifade edilir yüzlerce gen ortaya çıkardı . Tüp oluşumunun moleküler ve hücresel mekanizma çalışmak için, meydan trakeal gelişiminde bu genlerin rollerini anlamak. Burada, demonte bireysel gen ekspresyonu Drosophila embriyo haline dsRNA enjeksiyon ayrıntılı bir yöntem tanımlanmıştır. Biz başarıyla dsRNA enjeksiyon endojen dysfusion (DYS) gen ekspresyonu çaldı. Disfonksiyonu, trakeal füzyon hücreleri ifade bHLH-PAS protein ve trakeal şube füzyon 9, 10 için gereklidir . disfonksiyonu RNAi disfonksiyonu ifadesi tamamen ortadan kaldırdı ve trakeal füzyon defekti sonuçlandı. Bu nispeten basit bir yöntem Drosophilia'daki tissure ve organ gelişimi için requried genleri tanımlamak için bir araç sağlar.
Protokol
1. Embriyo Koleksiyon
- 25 kafesleri ayarlayın ° C 2-4 gün eski w 1118 flies.Grape suyu plakaları kullanarak toplama önce 1-2 gün süre içinde yumurta toplama senkronize etmek için gün boyunca her saat başı değiştirilir
- 25 1hr için embriyolar toplayın ° C
- Üzüm suyu agar ortasında bir jiletle hafifçe kesilmiş bir dikdörtgen parça, Kes, agar bir çizgi terk
- , Üzüm suyu agar parça, üzüm suyu plaka embriyo transferine yönelik bir metal prob kullanın agar ortasında hattına 45 derecelik bir açıyla embriyonun uzun ekseni ile düz bir çizgi, onları hizaya. Yaklaşık 50 embriyoların düz bir çizgi alın. Hat uzak işaret arka ucu ile....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
DsRNA enjeksiyon yöntemi mevcut burada çok hassas ve hızlı analiz Drosophila trakeal gelişme gen fonksiyonu sağlar. Bu yöntem, potansiyel olarak diğer doku ve organ gelişimi için gen fonksiyonu analiz etmek için de uygulanabilir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Çıkar çatışması ilan etti.
Teşekkürler
Yazarları Stephen Ekipler dysfusion cDNA, DYS antikor ve w 1118 sinekler için teşekkür etmek istiyorum.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Halokarbon yağı 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | |
| Picospritzer III pikopompa | Parker Hannifin Corporation | 051-0500-900 | |
| Mikropipetler | Fisher Scientific | 21170M | |
| Mikroyükleyiciler | Eppendorf | 930001007 |
Kaynaklar
- St Johnston, D., Nusslein-Volhard, C. The origin of pattern and polarity in the Drosophila embryo. Cell. 68, 201-219 (1992).
- Venken, K. J., Bellen, H. J. Emerging technologies for gene manipulation in Drosophila melanogaster. Nat. Rev. Genet. 6, 167-178 (2005).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
