Maya Colony Gömme Yöntemi

Summary

Işık ve elektron mikroskopi için kesit maya kolonileri izin gömmek için bir yöntem. Bu protokol, bir mantar toplum içinde hücre tiplerinin organizasyon anlayışına yönelik yeni bir araç sağlayan koloniler içinde sporulated hücreleri ve pseudohyphal hücrelerin dağılımı belirliyor.

Abstract

Embriyolar farklı hücre tipleri Desenlendirme metazoan gelişiminde kilit bir mekanizma. Koloniler ve biyofilm olarak mikroorganizmalar, topluluklar da hücre tiplerinin kalıplarını gösterilecek. Örneğin, maya S. cerevisiae, sporulated hücreleri ve pseudohyphal hücrelerin düzgün koloniler halinde dağıtılan değildir. Desenlendirme ve bu kalıplar altında yatan moleküler mekanizmaları fonksiyonel önemi halen yeterince anlaşılamamıştır.

Mantar kolonilerin hücre tiplerinin kalıplarını soruşturma açısından bir sorun metazoan doku aksine, koloniler halinde hücrelerin nispeten zayıf birbirine bağlı olduğunu. Özellikle, mantar kolonileri, en dokularda bulunan ekstrasellüler matriks aynı geniş düzeyde içermez. İşte bu kolonilerin hücre tiplerinin iç desenler ortaya koymaktadır maya kolonileri gömme ve kesit için bir yöntem rapor. Bu yöntem, ışık mikroskobu ve transmisyon elektron mikroskopi için uygun ince bölümler (0,1 μ) için yararlıdır (0,5 μ) kalınlığında kesitler hazırlamak için kullanılabilir. Aşçı ve pseudohyphal hücreleri kolayca bu hücrelerin iç yapısı EM tarafından görüntülenmiştir olabilir, ışık mikroskobu ile oval maya hücreleri ayırt edilebilir.

Yöntemi, agar kolonileri çevreleyen, onları Spurr orta infiltre ve sonra kesit dayanmaktadır. Çapı 1-2 mm aralığında bir Kolonileri, bu protokol için uygundur. Kolonilerin iç görüntülenmesine ek olarak, yöntem temel agar işgal koloni bölgesi görselleştirme sağlar.

Protocol

1. Colony İzolasyon ve Fiksasyon

1. Belirtilen süre için agar 300 kolonileri (izole edilmiş bir koloni çapı 1-2 mm olmalıdır) inkübe edin.
2. Koloni (yüz yukarı) ve dar bir spatula ile altta yatan orta çıkarın.
3. % 2 agar birkaç damla koyun 42 ° C katılaşır önce 1 ml agar yüzünde Pipetman ucu ve hemen yer koloni kullanarak bir mikroskop lamı üzerine.
4. 42 ° C kolonisi üzerinde% 2 agar birkaç damla koyun ve sağlamlaştırmak için izin.
5. Bu protokolün kalan bütün adımlar için eldiven giyin
6. Trim jilet ile, 4 blok ve 7 gün boyunca,% 2 paraformaldehid /% 2 glutaraldehid fiksatif içeren bir 3.5 mL borosilikat vida kapaklı fla....

Discussion

Sunulan yöntem kolonilerin iç yapıları ortaya koymaktadır. S. bir dizi hücre tiplerinin kalıplarını belirleyen yöntem etkili olduğundan cerevisiae suşlarının farklı koloni morfolojileri ve aynı zamanda ilgili bir tür S. paradoksus ^5, yöntem aynı zamanda geniş bir mantar ve diğer mikroorganizmalar üzerinde çalışmak için muhtemeldir .

Yöntemin başarısı için kritik bir adım koloninin dahil olmak üzere tüm koloni, protokol boyunca agar kaplı olduğundan emin olmak içi.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Osmiyum tetroksit	Elektron Mikroskobu Bilimleri	RT 19152
Silikon gömme kalıpları	Fisher Scientific	NC 9975029
Sikloalifatik epoksi reçine	Elektron Mikroskobu Bilimleri	RT 15004	ERL 4221
Epoksi reçine Elektron	Mikroskobu Bilimleri	RT 13000	DER 736
Nonenil Süksinik Anhidrit	Elektron Mikroskobu Bilimleri	RT 19050	NSA
2-Dimetil amin & # 8211; thanol	Elektron Mikroskobu Bilimleri	RT 13300	DMAE
Montaj ortamı	KPL Inc	71-00-16
Dönen tekerlek	Ted Pella, Inc.	Pelco 1055
Mikrotom	Leica Mikrosistemler	Ultracut S