Yöntem makalesi

Poliovirüs Kimlik Parçacık Aglütinasyon Yöntemi

DOI:

10.3791/2824

⸱

20 Nisan 2011

 ,  ,  , 
1Department of Virology II, National Institute of Infectious Diseases, 2New Product Design Department, Fujirebio Inc.

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Poliovirus (PV) virüs alıcı molekül kullanan son zamanlarda geliştirilen bir roman partikül aglütinasyon (PA) tahlil hızlı ve kolay bir kimlik izin verdi. Bu makalede, biz PA PV kimlik tayini için prosedür gösterecektir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Küresel Polio Eradikasyon Girişimi, laboratuvar tanısı, akut flask paralizi (AFP) vakalarının dışkı örneklerinden izole edilip tanımlanması PV kritik bir rol oynamaktadır. Dünya Sağlık Örgütü (WHO) Küresel Polio Laboratuvarı Network, PV izolasyon ve tanımlama şu anda sırasıyla hücre kültürü sistemi ve gerçek zamanlı RT-PCR kullanılarak yapılmaktadır. PV-eradikasyonu sonrası çağda, basit ve hızlı bir şekilde tespit işlemleri ulusal laboratuvarlar çocuk felci vakalarının hızlı onay için yararlı olacaktır. Bu çalışmada, biz PV tanımlanması için geliştirilen roman PA testinin prosedürü gösterecektir. Bu PA testi PV reseptör (PVR) molekülü ve PV tüm serotipleri belirli ve düzgün bir benzeşme virion etkileşimi kullanmaktadır. İşlem son derece basittir (reaksiyon plakalar bir adım prosedürü) ve hızlı (sonuçlar reaksiyon 2 saat içinde elde edilebilir), ve sonuç görsel (jelatin parçacıkların aglütinasyon gözlem) görülmektedir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Bakım ortamın hazırlanması (MM) ve büyüme ortamı (GM)

MM ve GM hazırlanması için, 1 Çocuk Felci laboratuar kılavuzuna bakın lütfen. Dulbecco'nun modifiye Eagle orta (DMEM),% 2 fetal buzağı serumu (FCS) ve% 10 FCS sırasıyla, MM ve GM yerine kullanılabilecek ile desteklenmiştir.

2. Anti-PV antikorların hazırlanması

  1. Anti-PV antikor (tip 1, 2 veya 3) Her flakon (vialde 0.5 ml) su ekleyerek sulandırın anti-PV antikor (RIVM PV yazarak antiserum). Bu sulandırılmış antikor çözümleri (her biri 0.5 mL), MM ayrı etiketli tüpler 4,5 ml ekleyin.
    Not: Bazı anti-PV antikor birçok sulandırılmış for....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu PA testinin benzersiz bakış PV 2 tespiti için anti-PV antikor PVR molekülünün yerine kullanılmasıdır. Bu PV 3-6 üç serotipe düzgün bir yakınlığa sahip PV ile sensitize jelatin parçacıklar belirli bir etkileşim sağlar. PVR monomerik formları virion tek bağlayıcı site sadece orta yakınlık (~ -8 M 10 -7 asitlik sabiti) 7 çünkü, jelatin parçacıklar hassasiyete PVR immunoadhesin formu (PVR IgG2a) 8 ve başarıyla PV izolatların sensitize jelatin parçacıklar belirli aglü.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Yeni Ürün Tasarımı Bölümü, Fujirebio Inc. Souji Masujima bir çalışanın

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Junko Wada Biz onu mükemmel teknik yardım için teşekkür ediyoruz. Prof Akio Nomoto PVR-IgG2a için nazik bir bakülovirüs ifade vektör sağlamak için minnettarız. Bu çalışma kısmen desteklenen Hibeler Yardım Polio Eradikasyon Tanıtım ve Araştırma, Sağlık, Çalışma ve Refah Bakanlığı Emerging Infectious Diseases ve yeniden ortaya çıkan.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Reaktifin Adı Şirket Katalog numarası Yorumlar
Hassaslaşmış-jelatin parçacıklar Fujirebio Inc. Test kiti
Sulandırma tampon Fujirebio Inc. Test kiti
Microtitration plaka Fujirebio Inc. Test kiti
Anti-PV antikor RIVM

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. World Health Organization. Polio Laboratory Manual (4th edition) WHO/IVB/04.10. , 4th Edition, World Health Organization. (2004).
  2. Arita, M., Masujima, S., Wakita, T., Shimizu, H. Development of a particle agglutination method with soluble virus receptor for identification of poliovirus. ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Poliovir s Resept rJelatin Partik lleriAgl tinasyon DeneyiVir s N tralizasyonuAntikor KombinasyonlarOda S cakl nda nk basyon96 Kuyucuklu PlakaG rsel G zlem

İlgili makaleler