$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Farelerin Temel Muhafazası
- Fareleri, sağlam tabanları ve yanları olan plastik kafeslerde ve kağıt parçalama gibi yumuşak yatak takımları ve yuvalama malzemelerinden oluşan bir tabaka içinde barındırın. Kıyılmış mısır koçanı veya odun talaşından oluşan yatak takımları kullanın ve sanitasyon için yatak takımlarının düzenli olarak değiştirildiğinden emin olun.
- Yiyecek ve suya ad libitum erişim sağlayın. Plastik kafesin üst kısmında bir yiyecek hunisi bulunur. Uygun şekilde formüle edilmiş fare maması peletlerini gıda hunisinden dağıtın ve bir su sebili sağlayın. Fareleri dış kirleticilerden korumak için kafesin üst kısmında bir hava filtresi bulunduğundan emin olun.
- Barınma tesisinde 12 saatlik bir aydınlık-karanlık döngüsünü takip ederek farelerin doğal sirkadiyen ritimlerini koruyun. Davranış testini günün aynı saatinde, ideal olarak hayvanın karanlık döngüsü sırasında, örneğin akşam saatlerinde yapın.
not: Muhafazadaki fareleri ayırt etmek için özen gösterilmelidir. Fareleri ayırt etmek için kulak zımbaları, kulak küpeleri ve kuyruk işaretleri gibi çeşitli yöntemler mevcuttur.
2. Barnes Labirenti Testi: İnşaat
- 120 cm çapında dairesel bir ahşap tahta elde edin.
- Dairenin çevresine 20 dairesel delik (4,5 cm çapında) kesin. Her deliği labirent kenarından 2.5 cm ve komşu deliklerden 13 cm uzakta olacak şekilde konumlandırın.
- Yüzeyleri düzeltin ve parlak beyaza boyayın (parlak bir renk önerilir).
- 20 deliğin her birinden yaklaşık 2-3 cm uzağa küçük fincan kancalarının yerleştirilmesi için labirent tahtasının bir tarafını belirleyin ve her delik için iki kanca yerleştirin (her deliğin her iki tarafında bir tane).
- Labirentin yan tarafındaki delikleri kancalarla kapatmak için sığ siyah (plastik) diskler kullanın. Diskleri labirentin dibinde tutmak için kalın lastik bantları sabitlemek için kancalar kullanın.
- Barnes labirentini yerden 120 cm yükseğe ve masa veya sandalye gibi benzer yükseklikteki diğer nesnelerden uzağa güvenli bir şekilde monte edin. Labirentin ortasını desteklemek için bir kutu veya tabure kullanılabilir.
- Labirentin 3 tarafına ekstra labirent ipuçları olarak her duvara bir şekle sahip büyük beyaz posterleri (üçgen, daire ve haç) yerleştirin. Her deneme için labirentin etrafındaki duvarlarda posterleri bulundurun.
- Labirentin son tarafında, gözlemcileri gizlemek için düz siyah bir perde kurun, böylece araştırmacılar labirentteki fareler tarafından görülmeden veriler doğru bir şekilde kaydedilebilir.
- Tüm labirent yüzeyinin kuşbakışı görünümü ile arenanın üzerine bir video kamera asın.
- Labirentin her yüzeyini (siyah diskler ve hedef kutu dahil) suyla ve ardından her fare denemesinden önce ve sonra %70 etanol solüsyonuyla temizleyin.
- 100 W'lık bir ışık kaynağını labirentin ortasına 25 cm yerleştirin (denemenin başında/bitişinde açın/kapatın) ve disklerin ve kancaların yere baktığından emin olun.
not: Test sırasında odadaki diğer tüm tepe ışıkları kapatılmalıdır. 100 W ışığın yanına asılan bir ultrasonik gürültü yapıcının eklenmesi önerilir. Her denemenin başında/bitişinde açın/kapatın.
3. Barnes Labirenti Testi: Prosedür
>NOT: Her denemeden önce ve sonra tüm labirent bileşenlerinin su ve %70 etanol çözeltisi ile temizlendiğinden emin olun ve test devam etmeden önce tamamen kuruması için zaman tanıyın. Denemeler için temizlik malzemelerinin yanı sıra zamanlayıcıların da hazır olduğundan emin olun.
- Güvenilir bir tanımlama yöntemi kullanırken tüm fareleri gruplar halinde barındırın. Labirentte aktif olarak koşmadıkları zamanlarda fareleri test odasının dışında tutun. Bu, ultrasonik gürültü yapıcıya zamanından önce maruz kalmamalarını sağlamak içindir.
- Fareleri, pençeleri elinizin üzerinde olacak şekilde kuyruğun tabanından nazikçe alıp tutarak tutun.
- Eğitim için, öğrenmeyi/edinimi değerlendirmek için farelerin arka arkaya 7 gün boyunca günde bir kez labirentte koşmasını sağlayın.
not: Hafızayı/akılda tutmayı değerlendirmek için daha sonraki bir tarihte tek bir uzun süreli deneme yapılabilir. Mevcut protokol, doğum sonrası 32. günden başlayarak ergen fareleri eğitti ve 4 aylıkken yetişkinlerde uzun süreli bir deneme yapıldı.
- Test süresi boyunca kullanmak için her fareyi rastgele bir hedef deliğe atayın. Delikler, labirentin altında veya labirent çevresinin dışında, labirentteki fare tarafından görülemeyecek şekilde 1-20 arasında etiketlenebilir.
- Atanan delik diskini küçük bir kara kutu (23 x 11 cm) ile değiştirin. En yakın kancalara bağlı lastik bantları kullanarak Barnes labirentine sıkıca tutturun.
not: Hedef kutu, farenin kolayca içine girebilmesi için yeterince sığdır veya farenin içine atlamak zorunda kalmamasını sağlamak için bir adım içerir.
- Test başlayana kadar 30 saniye boyunca alışmak için fareyi bir bardağın altındaki labirentin ortasına yerleştirin. Video kaydına başlayın.
- Işığı ve ultrasonik gürültü yapıcıyı açın. Hayvanın ilk başlığının sapmasını önlemek için bardağı bir ip mekanizması ile kaldırın. Bir zamanlayıcı başlatın ve gözlemlemek için perdenin arkasına oturun.
- Fare hedef deliğe girdikten sonra, deliği denemenin başlangıcında kullanılan aynı opak kap veya bir bağlayıcı ile kapatın ve ultrasonik gürültü yapıcıyı kapatın. Fare 5 dakika geçmesine rağmen hedefe girmediyse, fareyi hedef deliğe doğru toplayın.
- Farenin deliğe girdiğinden emin olun. Fare hedef kutunun içindeyken, deliği kapatın ve gürültü yapıcıyı kapatın. Farenin rahatsız edilmeden 1 dakika boyunca hedef kutuda kalmasına izin verin.
- Eğitim süresi boyunca hedef delik her fare için sabit kalacak olsa da, önceki farenin bıraktığı herhangi bir ipucunu/kokuyu takip etmediklerinden emin olmak için fareleri her gün rastgele bir sırayla çalıştırın.