Platform Yer Değiştirmeli Su Labirenti: Çalışma Belleğini Değerlendirmek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Hausser, N., et al. Travmatik Beyin Hasarı Sonrası Sıçanlarda Davranışsal Eksikliklerin Saptanması.J. Vis. Deneyim (2018).

Bu videoda, kemirgenlerde çalışma belleğini incelemek için kullanılan bir navigasyon görevi olan platform yer değiştirme ile Morris su labirenti testini açıklıyoruz.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Çalışma Belleği Su Labirenti

1. ekipman
   1. 28 cm yüksekliğe kadar suyla doldurulmuş ve 26 ± 1 °C'de tutulan bir tank kullanın.
   2. 26 cm yüksekliğinde bir stand üzerinde 10 cm çapında şeffaf bir akrilik cam platform kullanın.
      not: Platformun üst yüzeyi, üzerinde X işareti bulunan daire şeklinde silikon ile kaplanmalıdır. Bu, farelerin platforma tırmanmasına izin verir ve kaymamaları için onlara çekiş sağlar.
   3. Bir kronometre, bir ısı lambası, tek kullanımlık havlular, emici pedler, ekstra kafesler ve küçük, uzun saplı bir akvaryum balığı ağı toplayın. Farenin yüzmesini kaydetmek ve verileri bilgisayara göndermek için bir video kameraya bağlı bilgisayarlı bir video izleme sistemi kullanın. Videoyu ve verileri daha sonra analiz etmek için bilgisayara kaydedin.
2. Çalışma Belleği Su Labirenti Testi
   1. Sıçanlara art arda beş gün boyunca her gün dört çift deneme yapın, platformu dört kadranın her birine yerleştirin ve sıçanları aşağıda açıklandığı gibi dört başlangıç noktasının (N, S, E, W) her birinden başlatın.
   2. İlk olarak, deney boyunca kullanılacak başlangıç konum-platform çiftlerini tanımlayın.
      NOT: Platformun bulunduğu kadranların sırası ve kullanılan başlangıç noktası, yüzmenin beş gününün her biri için farklı bir sırada olmalı, ancak her sıçan için aynı olmalıdır.
      1. Dört başlangıç noktası (N, S, E veya W) ve dört platform konumu (Kadran 1, 2, 3 veya 4; Şekil 1). Örneğin, (N, 2; E, 4; S, 1; W, 3; bkz. Şekil 1). Platformlara çok yakın başlangıç noktalarından kaçınmak için dengeli bir düzen (rastgele değil) planlayın (Hiçbir başlangıç noktası, platform konumuyla aynı kadranda değildir). Platform kadranlarını ve dört başlangıç noktasını kullanarak bir veri sayfası oluşturun.
      2. Farelerin yüzerken videosunu çekmek ve belirtilen verileri (örneğin, yüzme süresi, hız, platformu bulmadan önce kat edilen mesafe) toplamak için video izleme yazılımının kullanması için bir protokol yazın.
         not: İzleme yazılımı, belirtilen süreden sonra kaydı otomatik olarak durduracaktır. Protokol, platformun nereye yerleştirildiğini, hayvan başına kaç deneme yapılacağını ve oturum başına kaç hayvanın test edileceğini ve ayrıca izin verilen maksimum süreyi (örneğin, 120 s) belirlemeye izin vermelidir.
      3. Seans başına 4-6 sıçan test edin.
         not: 6'dan fazla sıçan, sıçanlar arasındaki zamanlamada bir sorun yaratır ve işleyici tarafından hataya neden olabilir. Isınma kutuları da kalabalıklaşıyor.
   3. Deneme 1
      1. Video izleme yazılımını açın ve su labirenti haritası da dahil olmak üzere doğru protokolü yükleyin.
      2. Platformu atanan konuma yerleştirin (örn. 2; Şekil 1) ve yazılımdaki haritayla eşleşip eşleşmediğini kontrol edin. İzleme yazılımını, sıçan video kameranın görüş alanına girdiğinde başlayacak şekilde hazırlayın.
      3. Fareyi, belirlenen yerde duvara bakacak şekilde tanka yerleştirin (örn., N; Şekil 1) ve zamanlayıcıyı hemen başlatın.
      4. Farenin 120 s'nin platformu bulmasına izin verin. Sıçan platformu bulduğunda, zamanlayıcıyı durdurun ve zamanı çalışma sayfasına kaydedin. Sıçan platformu bulamazsa, onu elle platforma yönlendirin ve 120 saniye kaydedin. Farenin 15 saniye platformda kalmasına izin verin.
   4. Deneme 2
      1. Yazılımın Deneme 2 için hazır olup olmadığını kontrol edin. Fareyi aynı başlangıç pozisyonunda (N) tanka geri yerleştirin. Adım 1.2.3.4'ü tekrarlayın.
   5. Deneme 2'den sonra, fareyi 4 dakika boyunca ısıtılmış muhafazaya yerleştirin. Platformu ikinci konuma taşıyın (4; Şekil 1) ve yazılımdaki haritayla eşleşip eşleşmediğini kontrol edin.
   6. Dört başlangıç konumu/platform eşleştirmesinin tümü tamamlanana kadar Deneme 1 ve 2 prosedürlerini (adım 1.2.3–1.2.4) tekrarlayın.

Sonuçlar

Şekil 1. Su labirentinin diyagramı.Bu diyagram, çalışma belleği Morris su labirenti için olası platform konumlarını (1, 2, 3, 4) ve başlangıç noktalarını (N, S, E, W) göstermektedir. Sıçanların her başlangıç konumu/platform eşleştirmesinden iki denemeye izin verilir. Her günlük seans için toplam dört çift deneme için deneme çiftleri arasında 15 saniyelik bir ara aralık ve bir ısınma od...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Sprague-Dawley sıçanları	Charles Rivers Laboratuvarları	CD-IGS sıçanları suş kodu 001	Varışta erkek albino 300-350g
Fiberglas havuz	Üretici bilinmiyor		72" çap x 30" derinlik (~ 500 gal)
Pleksiglas platform	Maggie Maydanoz tarafından el yapımı		10 cm çapında 26" boyunda, kavrama yüzeyi sağlamak için platformun yüzeyine silikon uygulanmıştır
Kapaklı pleksiglas hayvan kutuları	UTMB Makine Atölyesi		2 kutu 10" g x 16" U x 9" y
Spot ışıklar/ısı lambaları	Ev Deposu		3 havuzun etrafında 2 hayvanları kurutmak için kutuların üzerinde
AnyMaze	San Diego Enstrümanları	9001	http://www.sandiegoinstruments.com/any-maze-video-tracking/