Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Kafa Direği İmplantasyon Cerrahisi
>NOT: Steril aletlerin kullanıldığından emin olun ve farklı bölgelerde ameliyat ve iyileşme düzenleyin. Bir kez ustalaştıktan sonra, implantasyon prosedürü yaklaşık 30 dakika sürer.
- Analjezi için, ameliyatın başlamasından 30 dakika önce, deri altına buprenorfin (0.05 mg / kg) enjekte edin ve hayvanı ev kafesine geri koyun.
not: Buprenorfinin analjezik etkileri, işlemin bitiminden çok sonra yaklaşık 12 saat sürer. Deneyimlerimize göre, fareler bu müdahaleyle ilgili herhangi bir sıkıntı belirtisi göstermez, ancak ameliyattan 24 saat sonra 0.05 mg / kg buprenorfin dozu önerilir.
- Hayvanı% 2.5 -% 3 izofluran gazı içeren bir odada uyuşturun. 3 dakika bekleyin ve hazne içindeki solunumu ve hareket eksikliğini gözlemleyerek farenin uygun şekilde uyuşturulup uyuşturulmadığını kontrol edin. Fareyi bir ısıtma yastığı ile ameliyat masasındaki bir burun konisine geçirin ve interdigital kıstırma ile geri çekilme refleksi olmadığını doğrulayın ve izofluranı% 1,5'e düşürün.
- Elektrikli bir tıraş bıçağı kullanarak farenin başını tıraş edin. Steril bir ortam elde etmek için, traş edilen bölgeyi iyot solüsyonu ile ovalayın ve ardından% 70 alkol ile ovalayın. Bu işlemi iki kez daha tekrarlayın.
- Lokal anestezi için başın derisinin altına lidokain hidroklorür (% 2, 2 mg / kg) enjekte edin ve etkilerin başlaması için 5 dakika bekleyin. Kuruluk nedeniyle göz hasarını önlemek için, farenin gözlerini topikal oftalmik veteriner merhemi ile örtün.
- Bir çift künt forseps ile başın arkasındaki cildi tutun ve bir çift künt makas (veya neşter) ile kafatasını ortaya çıkarmak için yaklaşık 1,5 cm'lik uzunlamasına bir kesi yapın.
- Bir neşter yardımıyla, periosteuumu çizin. Kafatası hafifçe kanamaya başlarsa baş direğinin sabitlenmesi tehlikeye girebileceğinden, çok sert kaşımamaya dikkat edin.
- Kafatasının ortasına bir damla yeşil aktivatör uygulayın (Malzeme Tablosuna bakınız). Bu, kemik geçirgenliğini artırarak çimentonun sabitlenmesini iyileştirecektir.
- Çimentoyu hazırlayın: bir kaşık polimeri (Malzeme Tablosuna bakınız) beş damla monomer ve bir damla katalizör ile karıştırın. Bir fırça yardımıyla, lambda ve bregma kafatası yer işaretleri arasına bol miktarda çimento karışımı uygulayın.
- Lambda'dan bregma'ya giden bir kaydırma hareketiyle baş direğini hızlı bir şekilde çimentonun üzerine yerleştirin. Kafa direği yerleştirildikten sonra, baş direğinin kafatasına düzgün bir şekilde yapışmasını sağlamak için alt kısmın etrafına daha fazla çimento uygulayın. Düzgün sabitlemeyi garanti etmek için, bir sonraki adıma geçmeden önce çimentonun bol miktarda uygulandığından ve kuruduğundan emin olun.
not: Bu sabitleme prosedürü ile kafa direği çıkmayacak ve uzun süreli, tekrarlanan testlere izin vermeyecektir; Bizim elimizde, baş direğinin çıkarılması %<10'dur.
- Karışımın pürüzsüz bir kıvamını sağlayan bir toz-sıvı oranı uygulayarak reçine karışımını hazırlayın. Yüzeyini korumak için reçineyi çimentonun uygulandığı yere ve baş direğinin etrafına uygulayın.
- Reçinenin kuruması için 3 dakika bekleyin ve kulakların arkasındaki cildi monofilament sütür ile kapatın. Pamuklu çubukla, ameliyat edilen bölgeye seyreltilmiş (%10-%20) iyot solüsyonu uygulayın.
not: Cildin reçineye yapışmadığından emin olun.
- Anesteziyi kapatın ve hipotermiyi önlemek için hayvanı kırmızı ılık bir ışığın altına yerleştirin. Nemli yiyecekleri ve hidrojeli veya jel bazlı başka bir su kaynağını kafesin zeminine yerleştirin. Bilincini geri kazanana kadar fareyi gözetimsiz bırakmayın. Hayvan prosedürden tamamen iyileşir iyileşmez (genellikle 30 dakika ila 1 saat sonra), sosyal etkileşimleri teşvik etmek için üç veya dört kişilik gruplarla bir kafese koyun.