Görüntüleme Kütle Spektrometresi Analizi için Over Kanseri İletişiminin Modellenmesi: Metastatik Over Tümörü Gelişiminde Küçük Moleküllü Kimyasal İletişimcileri Tanımlamak İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Zink, K. E. et. al. Görüntüleme Kütle Spektrometresi Kullanarak Dokular ve Hücreler Arasındaki Küçük Molekül İletişimini Yakalama. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu protokol, yumurtalık eksplantlarını fallop tüpü kanseri hücreleriyle birlikte kültürleyerek numune hazırlama tekniğini açıklar. Bu örnekler, tümör gelişimine yol açan hücreler ve dokular arasındaki küçük molekül değişimini tespit etmek için görüntüleme kütle spektroskopisi veya IMS kullanılarak görselleştirilir.

Protokol

Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

>1. Kokültürler için ITO Destekli Slaytın Ayarlanması ve İnkübe Edilmesi

1. Bölünmemiş kokültürler
   1. Agarozu sıcak bir plaka üzerinde 70 °C'de sıvılaştırın.
   2. 8 oyuklu bölücüyü indiyum tinoksit (ITO) ile muamele edilmiş sürgünün üzerine yerleştirin (Şekil 1A). Bölücü üzerindeki kauçuk taban, sürgüye yapışmaya yardımcı olur, ancak oyuklar arasında sızıntı veya karışım olmamasını sağlamak için agaroz kaplama sırasında sür....

Sonuçlar

Şekil 1: Bölünmemiş kokültürün numune hazırlanması için iş akışı. (A) 8 oyuklu hazneyi ITO kaplı sürgünün iletken tarafına yapıştırın. (B) Kokültür koşulları için yarıya bölünmüş yumurtalıkları kuyuların ortasına yerleştirin. (C) 300 μL agaroz/hücre süspansiyonunu doğrudan kuyucuklara ekleyin. Hava kabarcığı olmadığından ve yumurtalığı.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Denville	C1017-O	Hücreleri toplamak için
Kırlangıç	PEZGS0816	Millipore Millicell 'den yeniden tasarlandı EZ-sürgülü hazne sürgüsü
Sigma-Aldrich	34998-4L	Püskürtülmüş matris için çözücü
Eppendorf Belediyesi	5810 R	Hücreleri toplamak ve kaldırmak için süpernatan
Bruker Daltonic	8201344	Matris kurutulmuş slayt üzerine püskürtülür
Bruker Daltonic	8201346	Matris kurutulmuş slayt üzerine püskürtülür
Gibco (Gibco)	11995-065	Agaroz ile karıştırılmış ortam
Genesee Bilimsel	22-282	Agaroz alikotları için
Bruker	8237001	Ortak kültür kuluçka platformu
Sigma-Aldrich	A9414-10G	Kaplama için medya ile karıştırılır
Corning	4870	için plastik bölücüleri kesmek için kullanılır Bölünmüş odalar
Bruker Daltonic	8206195	Orta kütle aralığı için kalibrant
Sigma-Aldrich	343-242-5G	Düşük kütle aralığı için kalibrant
Simga-Aldrich	E2758	Hücre kültürü ortamı takviyesi
Peprotech A.Ş.	100-15	Hücre kültürü ortamı takviyesi
Hücre Kanalı	30-005-CR	Hücre kültürü ortamı takviyesi
Sigma-Aldrich	11074547001	Hücre kültürü ortamı takviyesi
Gibco (Gibco)	25030-081	Hücre kültürü ortamı takviyesi
Gibco (Gibco)	15140-122	Hücre kültürü ortamı takviyesi
Fisher Teknolojileri	A116-50	Matris çözümüne eklendi
HTX Teknolojileri		Matris uygulamak için

Gazetesi Gazetesi adet Gazetesi Serisi Gazetesi Serisi