Yöntem makalesi

Mezotelyal Hücre İzolasyonu: İnsan Omentum Dokusu Örneğinden Birincil Mezotelyal Hücreleri İzole Etme Tekniği

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Peters, P. N. et al. İnsan Periton Boşluğunun Organotipik Kültüründe Yumurtalık Kanseri Yayılımının Erken Adımlarının Modellenmesi. J. Vis. Uzm. (2015)

Bu videoda, birincil insan mezotelyal hücrelerini insan omentum örneğinden izole etmek için kullanılan protokol açıklanmaktadır. Mezotelyal hücreler, yumurtalık kanseri hücresi yapışmasını, invazyonunu ve proliferasyonunu araştırmak için in vitro yumurtalık kanseri modeli oluşturmak için kullanılabilir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Primer Transforme Edilmemiş Stromal Hücrelerin İzolasyonu ve Kültürü

  1. İnsan dokusunun toplanması ve hazırlanması.
    1. Karın ameliyatı sırasında çıkarılan 2cm3'lük insan omentum örneklerini alın ve dokuyu hemen RT fosfat tamponlu salin (PBS) içine daldırın (Şekil 1A). 3 cm x 2 cm'lik bir omentum parçası tipik olarak 1 milyon primer insan mezotelyal hücresi (HPMC) ve 200.000 ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Şekil 1. Birincil insan omental hücrelerinin izolasyonu. (A) PBS'de ameliyatta bir parça omentum toplanır ve laboratuvara taşınır. Doku 0.5 x g x 3 dk'da peletlenir ve taze PBS'ye aktarılır. (B) Omentum parçası 10 cm'lik bir petri kabına aktarılır, PBS ile yıkanır ve omentumu küçük parçalara (0,5 cm3) kesmek için neşterler kul.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
PbsBalıkçı BilimselSH3001304
Tek kenarlı tıraş bıçaklarıBalıkçı Bilimsel12-640
15 cm kültür yemekleriBD Biyolojik Bilimler353025
Fetal Sığır Serumu (FBS)Yaşam Teknolojileri16000044_3616914956
L-Glutamin ile DMEMCorning10-013-Özgeçmiş
MEM VitaminleriCorning25-020-CL
MEM Esansiyel olmayan amino asitlerCorning25-025-CI
Penisilin-Streptomisin Corning30-002-CI
ShakerTermo-BalıkçıMaksimum Q 4450
merkezkaçEppendorf Belediyesi5702
kuvözTermo-BalıkçıForma Seri II Su Ceketli CO2 İnkübatörü Model 3100
T-75 ŞişeleriBD Biyolojik Bilimler353136
T-175 ŞişeleriBD Biyolojik Bilimler353112
Pipet uçlarıYağmurP2, P10, P20, P200 ve P1000
mikroskopZeissEksen 200m
Anti-Integrin αVβ3 Antikoru, klon LM609EMD KırlangıçMAB1976
Beta 1Onkosinerjiİşletim Sistemi2966
Alfa 5 [CD49e]Kimlik Pharmingen555615
Beta 4 [CD104]EMD KırlangıçMAB 2058
Pipet uçlarıCorningFiltrelenmiş uçlar P2, P10, P20, P200 ve P1000
Cam şişe
arası Dersi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Mesothelial Cell IsolationHuman Omentum TissuePrimary Mesothelial CellsTissue MincingDensity SeparationCell CentrifugationGrowth Medium IncubationLight Microscopy ObservationCytokeratin 8 ExpressionVimentin Expression

İlgili makaleler