$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Hücrelerin İntraperitoneal Enjeksiyonu
>NOT: Deneylerimizde, patojenlere maruz kalma riskini sınırlamak için fareler, bariyer tesisimiz içindeki laminer bir hava akışı veya biyogüvenlik kabininde ele alınmaktadır. Bu tekniği net bir şekilde göstermek için, ekteki videodaki prosedürler hayvan çalışmaları için onaylanmış bir laboratuvarda gerçekleştirilmiştir. Bu özel teknik, hayvanların anestezi altında olmasını gerektirmez. Onaylanmış protokoller uyarınca, bu tekniği canlı hayvanlar üzerinde uygulayın. Bu çalışma için uygun fare suşlarını kullanın. Örneğin: insan yumurtalık kanseri hücresi (SKOV3ip.1 ve HeyA8) kolonizasyonunun incelenmesi için bağışıklığı baskılanmış, atimik çıplak fareler kullanın; fare yumurtalık kanseri hücresi (ID8) kolonizasyonunun incelenmesi için immünokompetan C57BL / 6 fareleri kullanın.
- Yumurtalık kanseri hücrelerinin 500 μl tek hücreli süspansiyonunu bir şırıngaya yükleyin ve steril kapaklı 25 G iğneye koyun. Bu, enjeksiyondan önce hücre kesilmesini azaltır.
- Fareyi boynunun tırnağından kaldırın ve avuç içi ve işaret parmağını kullanarak kuyruğu tutun ve sol arka bacağınızı yüzük ile küçük parmak arasına sabitleyin (fare sol elinizle tutulduğunda).
NOT: Karın organlarının travmatize olmasını önlemek için, fareyi enjeksiyon sırasında hareket edemeyecek şekilde iyice sabitleyin.
- Karın boyunca dizlerin hemen üzerinde bir çizgi hayal edin ve hayvanın sağ tarafında ve orta hatta yakın bir nokta bulun. Giriş noktası, son meme ucunun kraniyal ve hafif medialidir.
not: İğneyi farenin sağ tarafına sokmak çekumu önler ve bağırsakların delinme riskini azaltır.
- İğneyi farelerin karnının alt lateral bölgesine yaklaşık 0,5 cm derinliğe kadar sokun. İğnenin bir kan damarına veya diğer periton organlarına nüfuz etmediğini doğrulamak için pistonu geri çekin.
- Herhangi bir sıvı aspire edilmişse, şırıngayı (ve numuneyi) atın. Yeşilimsi kahverengi veya sarı bir aspirat, sırasıyla bağırsaklara veya mesaneye iğne penetrasyonunu gösterir.
- Numuneyi yavaş, sabit bir basınç kullanarak enjekte edin. İğneyi geri çekin ve fareyi kafesine geri koyun. Keskin bir kapta atmadan önce şırıngayı tekrar kapatmayın.
- Enjeksiyondan sonra belirli bir zaman noktasında CO2 boğulması ve hayati organın çıkarılması yoluyla fareleri feda edin.