Agaroz Spin Down Testi: Histolojik Analiz için Organoidleri Gömme Tekniği

Özet

Kaynak: Lee, S. et al. Hasta Prostat Kanseri Kemik Metastazı Örneklerinden ve Ksenogreftlerinden Türetilen Üç Boyutlu (3D) Organoidlerin Oluşturulması ve Analizi. J. Vis. Uzm. (2020)

Bu videoda, 3D prostat kanseri organoidlerini agaroza gömmek için bir spin-down testi gerçekleştiriyoruz. Bu gömülü organoidler, kanser büyümesini ve gelişimini incelemek için daha fazla histopatolojik analiz için kullanılabilir.

Protokol

1. Histoloji için Organoid İşleme: Agaroz Spin Down Yöntemi

>NOT: Bu protokol, Vlachogiannis ve arkadaşları tarafından yapılan önceki bir yayından uyarlanmıştır. Tüm organoid popülasyonlarını başarılı bir şekilde gömmek için agaroz gömmeyi içeren bir adım ekledik.

1. Mevcut medyayı kuyudan çıkarın. Bazal membran kubbelerini aspire etmemeye dikkat edin.
2. Eşit (1. adımdan çıkarılan ortamın hacmine eşit) bir hücre geri kazanım çözeltisi ekleyin ve 4 ° C'de 60 dakika inkübe edin.
3. Bir pipet kullanarak bazal membran kubbesini yerinden çıkarın ve bir pipet ucu kullanarak bazal m....

Sonuçlar

Şekil 1: Başarılı agaroz gömme için önemli bir adım. Hücre peletini 1.5 mL'lik tüpün duvarından ayırmak için bir işlem.

....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
1 mL Pipet Aleti	Gilson	F123602
1 mL Şırınga	BD Şırınga	329654
1,5 mL tüp	Spectrum Lab Ürünleri	941-11326-ATP083
25G İğne	BD Hassas Kayma İğnesi	305122
%4 Paraformaldehit (PFA)	Alfa Aesar	J61899
%70 Etanol (EtOH)	VWR (VWR)	BDH1164-4LP
agaroz	Fransa	50000
Hücre Kültürü Plakası - 24 kuyu	Yardımcı yıldız	3524
Hücre Kültürü Plakası - 48 kuyu	Yardımcı yıldız	3548
Hücre Kültürü Plakası - 6 kuyulu	Yardımcı yıldız	3516
Hücre Ayrışma Çözümü, Accumax	Yenilikçi Hücre Teknolojileri A.Ş.	AM105
Hücre Geri Kazanım Çözeltisi	Corning	354253
Hücre Kazıyıcı	Sarstedt	83,18
dPBS (dPBS)	Corning/Cellgro	21-031-Özgeçmiş
1 mL için pipet uçları (Mavi Uçlar)	Balıkçı Markası Redi-İpucu	21-197-85
Küçük Masa Üstü Santrifüj	ThermoFisher Bilimsel	75002426
OCT Bileşiği	Doku-Tek	4583
Su Banyosu	Balıkçı Sc	2320

Serisi adet adet Serisi Belediyesi adet