Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
3.2K görüntülenme
⸱
30 Nisan 2023
Kaynak: Crowell, P. D. et al. Organoid Kültür Kullanılarak Fare Prostat Epitel Hücrelerinin Farklılaşma Kapasitesinin Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2019)
Bu videoda, izole fare prostat epitel hücrelerinin matris jel halkası bazlı bir kültür tekniği kullanılarak kültürlenmesini gösteriyoruz. Bu yaklaşım, genetik veya farmakolojik manipülasyona yanıt olarak prostat epitel hücrelerinin 3D glandüler yapılar oluşturmak için farklılaşma kapasitesi hakkında tamamlayıcı bilgi sağlayabilir.
1. Kaplama: Prostat Epitel Hücrelerini Birincil Fare Organoid Kültürüne Sıraladı — ZAMANLAMA: 2-3 H (Poli-HEMA kaplı plaka hazırlığı hariç)
NOT: Matris jelinin altındaki kuyu yüzeyinde 2D koloni oluşumunu önlemek için plakalar Poly-HEMA ile kaplanmıştır. Poli-HEMA kaplı plakaları, sıralanmış bazal veya luminal prostat epitel hücrelerini fare organoid kültürüne yerleştirmeden 1 gün önce hazırlayın. Bundan sonra matris jel olarak anılacak olan indirgenmiş büyüme faktörü matris jelinin 1 mL alikotlarını, adım 1.1'den 2 saat önce buz üzerinde çözdürün. Y-27632 (ROCK inhibitörü), adım 1.1'den hemen önce fare organ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Fetal Sığır Serumu (FBS) | Sigma | F8667 Serisi | |
| B-27 takviyesi (50x), serumsuz | Thermo Fisher Bilimsel | 17504044 | |
| Gelişmiş DMEM/F-12 | Thermo Fisher Bilimsel | 12634010 | |
| μ Çanak 35 mm, yüksek | İbidi | 81156 | |
| Matrigel GFR Membran Matrisi | Corning | CB-40230C | |
| Penisilin-Streptomisin (10.000 U / mL) | Thermo Fisher Bilimsel | 15-140-122 | |
| Poli (2-hidroksietil metakrilat) (Poli-HEMA) | Sigma | P3932-25G | |
| Y-27632 dihidroklorür (ROCK inhibitörü) | Selleck Kimyasal | S1049-50MG | |
| A83-01 | Tocris (Türkçe) | 2939 | |
| (DiHydro) testosteron (5αAndrostan-17β-ol-3-on) | Sigma | A-8380 | |
| GlutaMAX | Thermo Fisher Bilimsel | 35050061 | |
| Normosin | Thermo Fisher Bilimsel | karınca-NR-1 | |
| Rekombinant İnsan EGF, Hayvansız | PeproTech Teknolojisi | AF-100-15 | |
| Rekombinant İnsan Noggin | PeproTech Teknolojisi | 120-10C | |
| RPMI 1640 Orta, HEPES (10 cs) | Thermo Fisher Bilimsel | 22400105 | |
| Fosfataz İnhibitörünü Durdur | Thermo Fisher Bilimsel | 78428 | |
| Komple Proteaz İnhibitörü Kokteyli | Sigma | 11836145001 | |
| Triton X-100 | Sigma | X100-5ML | |
| Sonik Çözücü | Thermo Fisher Bilimsel | FB120 |
