$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvanlarla ilgili tüm prosedürler yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Ürogenital Sistem (UGS) Diseksiyonu
NOT: Şematik Şekil 1'de sunulmuştur.
- CO2 inhalasyonel ötenazi yöntemi veya başka bir onaylanmış teknik kullanarak 3 aylık bir erkek C57BL / 6 fareye ötenazi yapın.
not: Deney için 3 ila 12 aylık fareler başarıyla kullanılabilir. Daha yaşlı fareler (6 aydan >) büyük olasılıkla UGS çevresinde daha fazla yağa sahip olacak ve bunun temizlenmesi gerekecektir. Lobların tanımlanması ve ayrılması 3 aydan küçük farelerde genellikle zordur. Deney için başka suşlar da kullanılabilir.
- Fareyi sırtına yerleştirin ve hayvanın ventral tarafı açıkta kalacak şekilde pimler kullanarak bacakları sabitleyin.
- Farenin karnına %70 etanol püskürtün ve silerek temizleyin.
not: Diseksiyondan önce karın kıllarının tıraş edilmesi gerekli değildir.
- Bir çift orta künt forseps ile cildi kas tabakasıyla birlikte karın bölgesinden kaldırın ve makas kullanarak karın üzerinde ters Y şeklinde bir kesi yapın.
- İlk olarak, penisin hemen üstünden sternuma doğru keskin bir makasla düz bir kesi yapın (Şekil 2a).
- Kesi tabanından her ayak parmağına doğru, uyluklara kadar kesin (Şekil 2b). Tüm karın bölgesini görmek için cildi her iki yandan ve alttan geriye doğru katlayın (Şekil 2c-e).
not: Kesim boyutu, farenin yaşına ve boyutuna bağlı olarak değişir. İlk düz insizyonun boyutu, farenin boyutuna bağlı olarak 1,5 ila 4 cm arasında değişebilir.
- UGS'yi ortaya çıkarmak için diğer organların üzerine geçin. Kahverengi-sarı bağırsakları kaldırın ve hareket ettirin (Şekil 2f). Karın yağ yastıkçıklarını (opak beyaz süngerimsi doku) forseps ile alın ve yanlara doğru hareket ettirin (Şekil 2g).
not: UGS, seminal veziküller, üretra, prostat, duktus deferens (vas deferens) ve idrar kesesini içerir. Tabana bağlı sıvı dolu mesane kesesi ile karakteristik opak beyaz yarım daire biçimli kemerler (seminal veziküllerdir) ile tanımlanabilir. Seminal veziküllerin hemen altında bulunan yarı saydam doku prostattır.
- UGS'yi bulun, idrar kesesini künt forsepslerle sıkıca tutun ve tüm UGS'yi fare karnından yukarı doğru kaldırın.
not: Mesane doluysa, forseps ile daha iyi bir tutuş sağlamak ve mesanenin yırtılma riskini azaltmak için önce küçük bir şırınga ile boşaltın.
- Mesaneyi yukarı çekmeye devam ederek, mesanenin ve prostatın altından bir makası omurgaya kadar kaydırın ve bir kesim yapın. Karın boşluğuna kalan tüm bağlantıları kesin (Şekil 2h ve 2i). Herhangi bir prostat dokusunu yanlışlıkla kesmekten kaçınmak için UGS'ye çok yakın kesmemeye dikkat edin.
not: UGS altında kesim yapılırken, makas farenin arkasına kadar sokulmalıdır, böylece kesim omur kolonu da koparır. Bu yöntem, UGS ile karın boşluğu arasındaki neredeyse tüm bağlantıların tek bir kesitte kesilmesine neden olur ve dokuyu fareden çıkarmak için gereken süreyi azaltır.
- UGS'yi çıkarın ve 6 cm'lik bir Petri kabına (Şekil 2j ve 2k) 2-6 mL (dokuyu kaplayacak kadar) fosfat tamponlu salin (PBS) veya Dulbecco'nun modifiye Eagle ortamına (DMEM, yüksek glikoz) yerleştirin ve bir diseksiyon mikroskobuna (10X büyütme) taşıyın.
not: Diseksiyon ortamını kalan adımlarda gerektiği gibi değiştirin.
