Mikromanipülasyon Kullanarak Tek Hücre Örneklemesi: Tek Hücreleri Kanser Hücresi Süspansiyonundan İzole Etme Tekniği

Abstract

Kaynak: Chen S. et al. Tek Hücreli Alt Akış Karakterizasyonu için Hedef Hücre Ön Zenginleştirme ve Tüm Genom Amplifikasyonu. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, aşağı akış analizi yapmak için hedef hücrelerden oluşan bir havuzdan tek hücreleri izole etme tekniği açıklanmaktadır. Bu yöntemde, tek bir hedef hücrenin yüksek hassasiyetli izolasyonu için mikroskoba takılan bir mikromanipülatör kullanılır.

Protocol

1. Tek Hücreli Örnekleme

1. Mikromanipülasyon
   NOT: Tüm genom analizi (WGA) gibi aşağı akış uygulamalarına izin vermek için, izole edilmiş tek hücreler 2 μL hücre lizis ana karışımına eklenecektir. İşlenecek hücre sayısına göre bir ana karışım hazırlayın. Pipetlemeden kaynaklanan ekstra hacimleri hesaplayın ve hücre lizis ana karışımını buzun üzerine yerleştirin.
   1. Hücre lizis ana karışımını hazırlayın (WGA kitinin bileşenleri, Malzeme ve Reaktifler Tablosu). Kısaca, 2.0 μL reaksiyon tamponu, 1.3 μL oktilfenoksipolietoksietanol (%10 çözelti), 1.3 μL 4- (1,1,3,3-tetrametilbutil....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (1x PBS)	Thermo Fisher Bilimsel	10010-015
Vacutainer EDTA (veya Na-heparin) tüpleri	Bd	366450 (veya 366480)	Hedef hücrelerin ex vivo yakalanması için reaksiyon tüpü olarak kullanılır
Pastör pipetleri 150 mm	Volac Belediyesi	D810	Hücrelerin C&R'ye düşük hacimli uygulanması için kullanılır
Yağlı kalem	Dako Belediyesi	S2002 Serisi	Hücre süspansiyonunu yerinde tutmak için cam kızaklarda kullanılır
Axiovert M200, Mikromanipülatör MMJ ve CellTram vario ile donatılmıştır	Zeiss/Eppendorf		Eldeki mikromanipülasyonu kullanın
Mikrokılcal damarlar (25 μm çapında), CustomTip I	Eppendorf Belediyesi	930001201	Hücreleri mikromanipüle etmek için kullanılır
0.2 mL PCR tüpleri	Biyozym	710920