Renal Kapsül Tümörü Ksenogreftleme: Prostat Karsinogenezini Değerlendirmek için Deneysel Hayvan Modeli Oluşturma Tekniği

Özet

Kaynak: Nicholson, T. M. et al. Prostat Karsinogenezi ve Benign Prostat Hiperplazisinin Değerlendirilmesi için Renal Kapsül Ksenogreftleme ve Subkutan Pelet İmplantasyonu. J. Vis. Uzm. (2013)

Bu videoda, insan kaynaklı prostat kanseri doku greftlerinin bağışıklığı baskılanmış bir alıcı farenin böbrek kapsülüne implantasyonunu gösteriyoruz. Bu teknik, tümör ilerlemesini değerlendirmek ve yeni terapötik stratejiler geliştirmek için kullanılabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Cerrahi İşlem: Renal Kapsül Ksenogreftleme

1. Anestezi indüksiyonundan önce, sağlık ve esenliği sağlamak için fareyi gözlemleyin.
2. İzofluran anestezisinin% 3-5 oranında indüksiyonu için fareyi odaya yerleştirin. Hayvan hareket etmeyi bıraktığında ve solunum hızı azaldığında, yüzüstü pozisyonda burun konisine aktarın ve anesteziyi% 1-3'te tutun.
3. Gerekirse, farenin arkasını tıraş etmek için makas kullanın. Atimik çıplak (nu/nu) fareler kullanılırken bu gerekli değildir.
4. Anestezinin yeterliliğini değerlendirmek için uzatılmış arka ayağın dağına sıkı bir baskı uygulayın. Fare basınca yanıt verirse, anestezinin etkili olması için daha fazla zamana ihtiyaç vardır. Gerekirse, yeterli anestezi elde etmek için anestezi akışını hafifçe ayarlayın.
5. Fare yeterince uyuşturulduğunda, cerrahi bölgeyi cerrahi iyot (Betadine) solüsyonu ve ardından% 70 alkol ile dezenfekte edin.
6. Steril eldivenler ve önlükler giyin; cerrahi bölgeye steril örtüler uygulayın. Sırt derisini bir çift dişli forseps ile kaldırın ve kaba makası kullanarak 2-3 cm'lik bir dorsal orta hat kesisi yapın.
7. Künt bir makas veya bir prob kullanarak, alttaki dermisi vücut duvarından ayırın (iki taraflı greftleme için insizyonun her iki tarafında veya tek taraflı greftleme için bir tarafta).
8. Fareyi yanal pozisyona getirin ve böbrek profilini kas duvarından görüntüleyerek böbreğin yerini belirleyin. Başparmak ve işaret parmağı ile karın üzerine hafif manuel baskı uygulamak, iç organların görüntülenmesine yardımcı olabilir.
9. İnce iris makası kullanarak büyük damarlardan ve omurilik sinirlerinden kaçınmaya özen göstererek, omurgaya paralel vücut duvarında 1 cm'lik bir kesi yapın. Bu kesiyi 1.5-2.0 cm'ye (böbreğin uzun ekseninden biraz daha uzun) genişletin, makasları ilk kesiye yerleştirdikten sonra nazikçe daha geniş açarak açın.
10. İşaret parmağını ve başparmağı kullanarak böbreğin her iki tarafındaki kas duvarının dışına hafif bir baskı uygulayarak böbreğin dışını dışa çıkarın. Cilt kenarlarını, vücut duvarına dayanacak olan dışsal böbreğin altına sokun. Böbrek dışlanırken, steril salin uygulayarak böbrek kapsülünün hidrasyonunu koruyun.
11. İnce # 5 forseps kullanarak, böbrek kapsülünü böbreğin parankiminden nazikçe kaldırın ve ince bir neşter ile kapsülde 2-4 mm'lik bir kesi yapın. Kesinin boyutu greftin boyutuna göre belirlenir ancak kapsülün bütünlüğünü korumak için en aza indirilmelidir.
12. İnce çekilmiş ve ateşle parlatılmış, kapsülün altında yuvarlatılmış kapalı bir ucu böbrek yüzeyine teğet olan bir cam Pasteur pipetini manipüle edin. Böbrek parankimine zarar vermemek için büyük özen göstererek greftler için küçük bir kapsül cebi nazikçe açın.
13. Böbrek kapsülünün kesik kenarı ince forseps ile kaldırılır ve greft, ateşle parlatılmış cam pipet kullanılarak kapsülün altındaki cebe yerleştirilir. Böbrek kapsülünün altına birkaç greft yerleştirilebilir ve böbrek yüzeyine eşit aralıklarla yerleştirilebilir.
14. Aşılama sırasında kapsül susuz kalırsa, steril tuzlu su uygulanarak nemlendirilmelidir.
15. Greftleme tamamlandığında, böbreği vücut boşluğuna geri yerleştirmek için kas duvarı kesisinin kenarlarını nazikçe kaldırın. Greftlerin kapsülün altından kaymadığını gözlemleyin.
16. Kas duvarını tek bir dikişle kapatın (4-0, FS-2 vicryl sütür). Cerrahi işlem, fareyi yeniden konumlandırarak karşı böbrek üzerinde tekrarlanabilir.
17. Dişli forseps kullanarak cilt kesi kenarlarını hizalayın ve kesiyi kapatmak için 2-3 cerrahi yara klipsi uygulayın. Analjezi uygulayın (deri altı enjeksiyon kullanarak 5-10 mg / kg carprofen kullanıyoruz) ve fareyi kurtarma kafesinde yanal yaslanmış pozisyona getirin. Bir lamba veya ısıtma yastığından gelen ısı ile vücut sıcaklığının korunmasını sağlayın. 15 dakikadan daha kısa sürede gerçekleşmesi gereken farenin tam olarak iyileşmesini gözlemleyin.
18. Fareler sonraki 24 saat boyunca ameliyat sonrası ağrı, kanama ve/veya diğer komplikasyon belirtileri açısından gözlemlenmelidir. Cerrahi insizyonları enfeksiyon belirtileri açısından düzenli olarak inceleyin.
19. Ameliyattan 7-14 gün sonra cerrahi yara klipsi çıkarma cihazı ile yara klipslerini çıkarın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Steril cerrahi önlük	Midwest Veteriner Tedarik	350.79866.2
Cerrahi maske	Midwest Veteriner Tedarik	350.50111.2
Steril Eldivenler	Kimberly Clark'ın fotoğrafı	55092
Refleks Yara Kesme Makinesi	F.S.T.	12031-09	Yara klipsi boyutuna karşılık gelir
Vicryl Sütür	Midwest Veteriner Tedarik	295-92100.2	4-0, FS-2, Emilebilir
Düz Keskin/Kör Makas	İnce Bilimsel Araçlar (F.S.T.)	14054-13
Graefe forseps (Tırtıklı, Dişli, Kavisli)	F.S.T.	11055-10
İzofluran Buharlaştırıcı	Supera Anestezi İnnov	VAP3000
İndüksiyon Odası	Supera Anestezi İnnov	RES644
Cam Pasteur pippetleri	Balıkçı Bilimsel	S67050 Serisi	5" uzunluk
Graefe forseps (Tırtıklı, Kavisli)	F.S.T.	11052-10
Graefe forseps (Tırtıklı, Düz)	F.S.T.	11050-10
Betadin	Webster Veteriner	07-836-3379
Steril tuzlu su	Midwest Veteriner Tedarik	193.74504.3	NaCl %0.9, enjekte edilebilir
Pamuk Uçlu Aplikatör	Midwest Veteriner Tedarik	001.06220.2
Yara Klipsleri	Braintree Bilimsel	ACS CS (İngilizce)	7 mm veya 9 mm klips kullanabilir
İzofluran	Midwest Veteriner Tedarik	193.33161.3
Diseksiyon mikroskobu	Leica Belediyesi	L2
Küçük Fareler Burun Konisi	Supera Anestezi İnnov	ACC526
Oksijen Debimetresi	Supera Anestezi İnnov	OKSİ660
Klip Sökücü Olur	F.S.T.	12033-00	evrensel

. Serisi Serisi mu