Protein Ekstraksiyonu ve Proteoliz: Prostat Tümör Dokusu Örneklerinden Protein Elde Etme ve Bunların Peptitlere Enzimatik Sindirimi İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Cheng, L. C. et al. Prostat Kanserinde Fosfoproteomu Araştırmak için Etiketsiz Kantitatif Kütle Spektrometresi ile Birleştirilmiş Fosfopeptit Zenginleştirme. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, prostat tümör dokusundan peptitler elde etmek için protein ekstraksiyonu ve sindirim tekniği açıklanmaktadır. Daha ileri analizlerdeki bu peptitler, onkoterapi için yeni hedeflerin belirlenmesine yardımcı olabilir.

Protokol

1. Protein Ekstraksiyonu

1. Lizis tamponunu hazırlayın (Tablo 1). (Hacim, hasat edilecek numune sayısına bağlıdır.)
2. Doku toplama
   1. Tümörü tartın ve bir kültür test tüpündeki her 100 mg doku için 2 mL buz gibi soğuk lizis tamponu ekleyin. (Tipik olarak, 50 ila 150 mg doku ıslak ağırlığı gereklidir.)
3. Elde tutulan veya tezgah üstü bir homojenizatör kullanarak lizatı homojenize edin (2 saniye boyunca 15 kez darbe). Homojenizatörü ilk numuneden önce ve numuneler arasında art arda %10 çamaşır suyu, %70 etanol ve deiyonize su kullanarak temizleyin.
4. Azaltmak ve alkillemek için hom....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ultra Düşük Sıcaklıklı Dondurucu	Panasonic Belediyesi	MDF-U76V
Dondurucu -20 °C	VWR (VWR)	SCPMF-2020 Tezli Muhafızlar
Salıncak rotorlu kova	ThermoFisher Bilimsel	75004377
Uçtan uca döndürücü	ThermoFisher Bilimsel	415110Q
Düşük protein bağlayıcı Eppendorf tüpleri	Eppendorf Belediyesi	22431081
Tripsin, TPCK Tedavi Edildi	Worthington Biyokimyasalları	LS003740
Lizil Endopeptidaz	Wako Saf Kimya Endüstrileri, Ltd.	125-05061
MilliQ su			Tüm çözeltileri ve tamponları hazırlamak için kullanılan deiyonize su
Sonik Çözücü	Balıkçı Bilimsel	FB-120	ses ikonikatörü
Polytron Sistemi PT	Kinematica AG	PT 10-35 GT	homojenizatör

Serisi