Method Article

Genetik Olarak Tasarlanmış Fare Modellerinde Prostat Kanserinin Modellenmesi: Fare Ön Prostat Lob Hücrelerinde CRISPR/Cas9 Aracılı Lokalize Gen Düzenleme Tekniği

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Riedel, M. et al. CRISPR'ın Gen Değişikliği için Murin Prostatına Virüs İletimi. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, adenovirüs tabanlı bir dağıtım sistemi kullanarak prostat bezi hücrelerindeki belirli genleri düzenlemek için bir yöntem açıklanmaktadır. Yaklaşım, prostat kanseri için yeni fare modelleri geliştirmek için CRISPR teknolojisini kullanarak gen ekspresyonunun ortotopik ve lokalize değiştirilmesine izin verir.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Murin Prostatına virüs iletimi

  1. Steril 1 mL şırınga ve 27G x 1/2 "iğne ile intraperitoneal enjeksiyon ile hayvanı uyuşturun. Vücut ağırlığında 0.01 mL / g anestezi dozu kullanın. İşlem 30 dakikadan uzun sürerse, her 30 dakikada bir başlangıç dozunun 1 / 3'ünü enjekte ederek anesteziyi koruyun.
  2. Kas gevşemesini, pedal çekilmesini ve palpebral refleksleri değerlendirerek anestezik derinliği inceleyin. Refleks kaybı gözlendiğinde, hayvanın alt karnını tıraş ed....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

figure-results-1
Şekil 1: Prosedürün gösterimi. İşlem, Platt ve arkadaşları tarafından oluşturulan Rosa26-LSL-Cas9-EGFP faresinde gerçekleştirilir. Anterior prostat (AP) seminal veziküle (SV) bağlanır. Gen ekspresyonunu değiştirmek için kılavuz RNA ve bir Cre proteini eksprese eden virüs parçacıkları ön prostata enjekte edilir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
B6J.129(B6N)-Gt(ROSA)26Sor^{tm1(CAG-cas9*,-}
^{EGFP)Fezh} /J fareler		Jackson Laboratuvarı26175
0,5 ml U-100 insülin şırıngasıBd324825virüs enjeksiyonu için
1 ml şırıngaBd300013anestezi enjeksiyonu için
30 G 1/2'' iğneBd304000anestezi enjeksiyonu için
6-0 Polisorb SütürMedtronic Bilişim A.Ş.GL889karın zarını kapatmak için
Tek kullanımlık sterilize cerrahi örtüBirden fazla tedarikçi
Isıtma yastığıBirden fazla tedarikçi
Povidon-İyot Hazırlama PediBalıkçı Bilimsel06-669-70
Kırpma makinesiAesculap BelediyesiGT415Karın tıraşı olmak
Dumont ForsepsF.S.T11252-00
Halsey Mikro İğne TutucuF.S.T12500-12
İris MakasıF.S.T14094-11
Dar Desen ForsepsF.S.T11002-12
Yüzük ForsepsF.S.T11106-09
Yara Klipsi Sistem Kolu,
dahil Klip -leri		F.S.T12030-01cildi kapatmak için
Yara Klipsi Sistem SökücüF.S.T12030-04
1 adet PBSGibco (Gibco)10010-023
AntisedanHayvan tesisinden elde edildi
ÖksüzolHayvan tesisinden elde edildi
MedetomidinhidrokloridHayvan tesisinden elde edildi
MidazolamHayvan tesisinden elde edildi
%100 EtanolBalıkçı Bilimsel22-032-103
Göz merhemiTakeda Belediyesi7242
Virüs (AAV, AV)Birden fazla tedarikçiBu protokolde kullanılan virüs şirket içi bir üretimdir
Serisi Serisi arası

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

CRISPR Cas9 Gene EditingProstate Cancer ModelingAdenovirus Delivery SystemMouse Anterior ProstateLocalized Gene AlterationCre Recombinase ActivityGFP Reporter ExpressionGenetic Mutation TrackingSurgical Injection TechniqueAnesthetized Mouse Model

Related Articles