İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Boyama
- Boyamaya devam etmeden önce, slayttaki dokunun etrafındaki fazla solüsyonları kağıt mendil ile silin.
- Tüm boyama işlemi boyunca slayt üzerindeki dokunun kurumasını önlemek için slaytları oda sıcaklığında ve oda nemi koşullarında yerleştirin.
- Slaytları birkaç damla potasyum permanganat ile 5 dakika oksitleyin. Potasyum permanganat hacminin her slayttaki doku bölümünü kaplamak için yeterli olduğundan emin olun.
- Oksitlenmiş slaytları damıtılmış su ile bir Coplin kavanozunda 2-3 değişiklikle durulayın. Dokunun mavi rengini gözlemleyin.
- Şimdi, 5 dakika boyunca birkaç damla oksalik asit ekleyerek bu slaytları ağartın. Oksalik asit hacminin her slayttaki doku bölümünü tamamen kaplamak için yeterli olduğundan emin olun.
- Slaytları damıtılmış suyla doldurulmuş Coplin kavanozuna daldırarak durulayın. Durulamayı 2x-3x yapın.
- Şimdi, bu slaytları kısaca% 95 alkolde yıkayın ve ardından slaytları 8-24 saat boyunca bir elastin çözeltisine (5 g
not: Elastin çözeltisi uçucudur ve lekelenme süresi nispeten uzundur, bu nedenle elastik boyama ile slaytları, sızdırmazlık kapaklı şeffaf bir cam şişe gibi kapalı bir kaba daldırmak en iyisidir. Kabın kapasitesi ve elastin çözeltisinin hacmi, tüm slaytların tamamen daldırılmasını sağladığı sürece, daldırılan slaytların sayısına bağlıdır.
- Her doku bölümünü iyi bir şekilde ayırt etmek için bu slaytları 1-2 dakika boyunca doğrudan% 95 etanole batırın.
not: Farklılaşma, doku tarafından emilen fazla lekelenmeyi gideren ve renkleri daha net hale getiren doku bölümünün yükündeki değişikliği ifade eder. Elastin çözeltisi boyandıktan sonra, farklılaşmada herhangi bir zorluk yaşamamak için numuneler damıtılmış su ile yıkanmamalıdır. Mavi-siyah elastik liflerin lekelenmesi ve gri arka plan için gerektiği gibi mikroskobik olarak kontrol edin. Dokuyu biraz daha az ayırt etmek daha iyidir, çünkü sonraki Van Gieson'un karşı boyası da elastik lekeyi bir şekilde çıkarabilir.
- Farklılaştırdıktan sonra bu slaytları damıtılmış suyla tamamen durulayın.
- Van Gieson'ın solüsyonundaki slaytları 1 dk.
boyunca boyayın
not: Van Gieson'ın solüsyonunun hacminin, her slayttaki doku bölümünü tamamen daldırabilmek için yeterli olması gerekir.
