Alt Kültürleme ve Nakliye için Sferoidlerin Bölünmesi: İnce Bağırsak Nöroendokrin Tümöründen Sferoidlerin Çoğaltılması ve Aktarılması İçin Bir Prosedür

Özet

Kaynak: Ear, P. H. et al. İnce Bağırsak Nöroendokrin Tümör Sferoidlerinin Kurulması ve Karakterizasyonu. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, ince bağırsak nöroendokrin tümör hücrelerinden geliştirilen sferoidleri bölmek ve çoğaltmak için bir strateji göstermektedir. Bu sferoidler ince bağırsak nöroendokrin tümör belirteçlerine sahiptir ve çoğaltılabilir ve ayrıca anti-kanser ilaçlarını test etmek için kullanılabilir.

Protokol

1. SBNET Sferoidlerini Bölme

NOT: Bu, genişletme ve diğer araştırmacılarla paylaşma için yapılır.

1. ECM'yi mekanik olarak kırmak için bir P1000 pipeti kullanın ve ECM'yi SBNET sferoidleri ile steril 1,5 mL'lik bir tüpe aspire edin.
2. 4 ° C'de 1.000 x g'da santrifüjleyin, tüm süpernatanı çıkarın ve tüpü buzun üzerine yerleştirin.
3. Pelete yeni ECM'nin hacminin 2-4 katı ekleyin. Yeni ECM'yi eski ECM ve SBNET sferoidleri ile 10 kat yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın ve hava kabarcıkları oluşmasını önleyin.
4. ECM ve SBNET sferoid karışımının 5-20 μL'sini yeni bir plakaya aktarın ve ECM'nin katılaşmasına izin verin.
5. Yeni SBNET ortamı ile örtün ve inkübatöre aktarın. Geri kazanım oranı yaklaşık %95 ila %100'dür.
6. SBNET sferoidlerini başka bir laboratuvara göndermek için, yeni ECM'li SBNET sferoidlerini bir T25 şişesine aktarın ve ECM'nin katılaşmasına izin verin.
7. T25 şişesini SBNET küresel ortamla doldurun, kapağı sıkıca vidalayın ve sevkiyat paketini hazırlayın.
8. Bir SBNET sferoid kültürü aldıktan sonra, kültür ortamını çıkarın ve SBNET sferoidlerini kültüre geri koymak için 1.1 ila 1.5 arasındaki adımları uygulayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
DMEM (Ömer Çiçeğ	Gibco (Gibco)	11965-092	Doku hazırlığı için ortam
DMEM/F-12	Gibco (Gibco)	11320-033	Organoid kültürler için ortam
FBS (FBS)	Gibco (Gibco)	16000044	Kültür ortamı için reaktif
Glutamine	Gibco (Gibco)	A2916801	Kültür ortamı için reaktif
Insülin	Sigma	I0516	Kültür ortamı için reaktif
Matrigel (Matrijel)	Corning	356235	Gömmek ve sabitlemek için matris organoidler
Nikotinamid	Sigma	72340	Kültür ortamı için reaktif
KALEM/STREP	Gibco (Gibco)	15140-122	Kültür ortamı için reaktif

Serisi