$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
1. SBNET Sferoidlerini Bölme
NOT: Bu, genişletme ve diğer araştırmacılarla paylaşma için yapılır.
- ECM'yi mekanik olarak kırmak için bir P1000 pipeti kullanın ve ECM'yi SBNET sferoidleri ile steril 1,5 mL'lik bir tüpe aspire edin.
- 4 ° C'de 1.000 x g'da santrifüjleyin, tüm süpernatanı çıkarın ve tüpü buzun üzerine yerleştirin.
- Pelete yeni ECM'nin hacminin 2-4 katı ekleyin. Yeni ECM'yi eski ECM ve SBNET sferoidleri ile 10 kat yukarı ve aşağı pipetleyerek karıştırın ve hava kabarcıkları oluşmasını önleyin.
- ECM ve SBNET sferoid karışımının 5-20 μL'sini yeni bir plakaya aktarın ve ECM'nin katılaşmasına izin verin.
- Yeni SBNET ortamı ile örtün ve inkübatöre aktarın. Geri kazanım oranı yaklaşık %95 ila %100'dür.
- SBNET sferoidlerini başka bir laboratuvara göndermek için, yeni ECM'li SBNET sferoidlerini bir T25 şişesine aktarın ve ECM'nin katılaşmasına izin verin.
- T25 şişesini SBNET küresel ortamla doldurun, kapağı sıkıca vidalayın ve sevkiyat paketini hazırlayın.
- Bir SBNET sferoid kültürü aldıktan sonra, kültür ortamını çıkarın ve SBNET sferoidlerini kültüre geri koymak için 1.1 ila 1.5 arasındaki adımları uygulayın.