Gömülü Eksozomların Kesitlendirilmesi, Boyanması ve TEM Görüntülemesi: TEM Kullanarak Eksozomların Yapısal Özelliklerini Görselleştirmek İçin Bir Protokol

Özet

Kaynak: Jung, M. K. et al. Transmisyon Elektron Mikroskobu ile Eksozomların Numune Hazırlama ve Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, gömülü eksozomların ince bir kesitini hazırlama tekniği açıklanmaktadır. Bu bölümler, eksozomların yapısal özelliklerini incelemek için transmisyon elektron mikroskobu veya TEM kullanılarak daha fazla boyanabilir ve görüntülenebilir.

Protokol

1. Eksozomların Kesitlenmesi

1. Saflaştırılmış eksozom örneğini (HCT116 hücrelerinin kültür süpernatından elde edilen) saf düşük viskoziteli gömme karışımına gömerek eksozom bloğu hazırlayın.
2. 60 nm kalınlığındaki eksozom bloğunu bir ultra-mikrotomdan geçirin.
3. 20 dakika boyunca% 2 uranil asetat ve 10 dakika boyunca kurşun sitrat ile çift leke
   Reynolds kurşun çözeltisi için, toplam 50 mL damıtılmış suya 1.33 g kurşun nitrat ve 1.76 g sodyum sitrat ekleyin.
4. 80 kV'da transmisyon elektron mikroskobu altında şebekeyi gözlemleyin.
5. "Al"a tıklayın ve ardından CCD kamera sisteminde elektron mikroskobu altında 80 kV'da "Dosya" ve "Farklı kaydet"e tıklayın. Pozlama süresi için otomatik ayarları izleyin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Ultra mikrotom	Leica Belediyesi	UCT (Cesaret Yüksek
Uranil asetat	EMS	22400	Tehlikeli kimyasal
Kurşun sitrat	EMS	17900
Transmisyon Elektron Mikroskobu	Hitachi	H7600
Nikel ızgara	EMS	G200-NI
Bakır ızgara	EMS	G200-Cu
Transmisyon Elektron Mikroskobu	JEOL	JEM2200FS

adet adet Serisi Serisi