Method Article

Gömülü Eksozomların Kesitlendirilmesi, Boyanması ve TEM Görüntülemesi: TEM Kullanarak Eksozomların Yapısal Özelliklerini Görselleştirmek İçin Bir Protokol

April 30th, 2023

In This Article

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Jung, M. K. et al. Transmisyon Elektron Mikroskobu ile Eksozomların Numune Hazırlama ve Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, gömülü eksozomların ince bir kesitini hazırlama tekniği açıklanmaktadır. Bu bölümler, eksozomların yapısal özelliklerini incelemek için transmisyon elektron mikroskobu veya TEM kullanılarak daha fazla boyanabilir ve görüntülenebilir.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Eksozomların Kesitlenmesi

  1. Saflaştırılmış eksozom örneğini (HCT116 hücrelerinin kültür süpernatından elde edilen) saf düşük viskoziteli gömme karışımına gömerek eksozom bloğu hazırlayın.
  2. 60 nm kalınlığındaki eksozom bloğunu bir ultra-mikrotomdan geçirin.
  3. 20 dakika boyunca% 2 uranil asetat ve 10 dakika boyunca kurşun sitrat ile çift leke
    Reynolds kurşun çözeltisi için, toplam 50 mL damıtılmış suya 1.33 g kurşun nitrat ve 1.76 g sodyum sitrat ekleyin.
  4. 80 kV'da transmisyon elektron mikroskobu altında şebekeyi gözlemleyin.
  5. "Al"a tıklayın ve ardından CCD kamera sisteminde elektron mikroskobu altında 80 kV'da "Dosya" ve "Farklı kaydet"e tıklayın. Pozlama süresi için otomatik ayarları izleyin.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Ultra mikrotomLeica BelediyesiUCT (Cesaret Yüksek
Uranil asetatEMS22400Tehlikeli kimyasal
Kurşun sitratEMS17900
Transmisyon Elektron MikroskobuHitachiH7600
Nikel ızgaraEMSG200-NI
Bakır ızgaraEMSG200-Cu
Transmisyon Elektron MikroskobuJEOLJEM2200FS
adet adet Serisi Serisi

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Exosome SectioningTransmission Electron MicroscopyUranyl Acetate StainingLead Citrate StainingUltra microtome SectioningNickel Grid PreparationExosome Imaging ProtocolExosome Structural AnalysisTEM Sample PreparationExosome Visualization

Related Articles