Yöntem makalesi

Ekzozomal Kesitlerin Altın İmmün Boyama: Ekzozomal Lümendeki Tanısal Belirteçleri Görselleştirmek İçin Bir Teknik

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Jung, M. K., Mun, J. Y. Transmisyon Elektron Mikroskobu ile Eksozomların Numune Hazırlama ve Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, ultra ince ekzozomal kesitlerin lümen bölgesinde lokalize biyobelirteçlerin altın immün boyamalarını gösteriyoruz. Bu teknik, hastalıklı hücreler tarafından salgılanan eksozomların içindeki hedef moleküllerin görüntülenmesi ile hastalıkların erken teşhisini sağlar.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Eksozom Kesitlerinin İmmüno-Boyanması ve Görüntüleme

  1. Bir ultra-mikrotom kullanarak bir eksozom bloğunun 60 nm ultra ince kesitlerini hazırlayın ve bunları bir nikel ızgarada toplayın.
  2. Serbest aldehit gruplarını söndürmek için ızgaraları 50 μL'lik 0.02 M glisin damlalarında 10 dakika inkübe edin.
  3. 100 μL DW'de her biri 10 dakika boyunca üç kez durulayın. % 1 BSA içeren PBS'de oda sıcaklığında 1 saat inkübe edin.
  4. Izgaraları 50-100 μL damla anti-KRS antikoru (% 0.1 BSA içeren PBS'de 1:100) içinde 1 saat inkübe edin (Gerekirse, bu adım gece boyunca 4 ° C'de gerçekleştirilmelidir.)
  5. Izgaraları, her biri ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Uranil asetat EMS 22400Tehlikeli kimyasal
Kurşun sitrat EMS 17900
Transmisyon Elektron Mikroskobu Hitachi H7600
Bakır ızgara EMS G200-Cu
glisin Sigma 022K5404
Fosfat tampon tuzlu su Sigma P4417 Serisi
Sığır serum albümini Aurion Belediyesi 25557
Saflaştırılmış anti-insan CD274 (B7-H1, PD-L1) antikoruBiyo Efsane 329710Bütün Immumogold Dağı
Saflaştırılmış Fare IgG2b, κ Isotype Ctrl Biyo Efsane401202Bütün dağı Immumogold (Kontrol)
2. Anti-fare IgG konjuge 9-11 nm altın parçacığı Sigma G7652
Paraformaldehit EMS19210
adet adet Serisi Serisi Serisi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Exosome ImmunostainingGold Nanoparticle LabelingTransmission Electron MicroscopyExosome Section PreparationPrimary Antibody IncubationSecondary Antibody BindingGlycine QuenchingBlocking Buffer TreatmentUranyl Acetate StainingLead Citrate Contrast

İlgili makaleler