Yöntem makalesi

Saflaştırılmış Eksozomların Negatif Boyanması: Transmisyon Elektron Mikroskobu Kullanılarak Eksozom Morfolojisini Görselleştirmek İçin Bir Prosedür

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Jung, M. K. et al. Transmisyon Elektron Mikroskobu ile Eksozomların Örnek Hazırlanması ve Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, saflaştırılmış eksozomların negatif boyanması için bir prosedür açıklanmaktadır. Negatif boyanmış eksozomlar, transmisyon elektron mikroskobu kullanılarak görüntülenir. Bu teknik, eksozomların morfolojisini görselleştirmeye yardımcı olur.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Negatif Boyama

  1. İnce formvar / karbon film kaplı 200 gözenekli bakır EM ızgaralarını kızdırma deşarjı ile 1 dakika boyunca kızdırma deşarjı.
  2. Saflaştırılmış eksozomları 1 mL %2 paraformaldehit (PFA) ile 5 dk.
    sabitleyin NOT: Paraformaldehit dumanları zehirlidir. Tüm işler havalandırmalı bir davlumbazda yapılmalıdır.
  3. Izgaraya 5-7 μL eksozom süspansiyon solüsyonu yükleyin ve 1 dakika inkübe edin. Eksozom konsantrasyonu çok yüksekse, konsantrasyonu yarısı ila beşte biri arasında seyreltin.
  4. EM ızgarasının yüzeyinde ~ 20 damla filtrelenmiş% 1 uranil asetat (UA) çözeltisi ile şırınga ile hemen boyayın.
  5. Izgara kenarını filtre kağıdı ile temas ettirerek ızgara üzerindeki fazla UA çözeltisini çıkarın.
  6. Izgarayı bir damla su ile hızlıca durulayın. Bu adım, fazla boyama solüsyonunu giderecektir.
  7. Izgarayı cımbızla tutarak masanın üzerine yerleştirin ve oda sıcaklığında 10 dakika kuruması için ızgarayı kısmen bir kültür kabı ile örtün.
  8. 80 kV'da bir TEM tarafından gelecekte gözlemlenmek üzere şebekeyi bir EM şebeke kutusunda saklayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Uranil asetatEMS22400Tehlikeli kimyasal
Transmisyon Elektron MikroskobuJEOLJEM2200FS
Kızdırma deşarj cihazıJEOLJFC1100E
ParaformaldehitEMS19210
Formvar karbon kaplı Bakır
Izgara (200 ağ)		EMSFCF200-CU
Formvar karbon kaplı Nikel
Izgara (200 ağ)		EMSFCF200-NI
adet

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Eksozom Safla t rmaUranil Asetat BoyamaParaformaldehit ile SabitlemeEM Izgaras Haz rlamaGlow Discharge lemiEksozom AdsorpsiyonuIzgara Kurutma

İlgili makaleler