Arka Bacak İskelet Kası Ekstraksiyonu: Murin Modelinden Arka Bacak İskelet Kaslarını Eksize Etme Prosedürü

Özet

Kaynak: Bonetto, A. et al. Kanser Kaşeksi Çalışması için Bir Model Olarak Kolon-26 Karsinom Tümörü Taşıyan Fare. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu videoda, bir fare modelinden arka bacak iskelet kaslarını çıkarma prosedürünü açıklıyoruz. Eksize edilen kaslar, daha ileri aşağı akış analizine kadar daha düşük sıcaklıklarda saklanabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Doku ve Organ Eksizyonu

NOT: Dokuların biyokimyasal veya moleküler biyoloji tahlillerinde kullanılması için, her organ ve dokuyu tartmayı ve bir parçayı hemen önceden etiketlenmiş kriyotüplere yerleştirmeyi planlayın. Sıvı nitrojeni dondurun ve -80 °C'de saklayın.

1. Doku örneklerinin kürkle kontaminasyonunu önlemek için, tüm vücuda% 70 etanol püskürtün.
2. Fareyi sırtüstü pozisyonda bir diseksiyon yatağına yerleştirin ve ayağı yükseltilmiş bir büret kelepçesine takarak bir uzvu dikey olarak uzatın.
3. Alt ekstremitenin derisini Dumont forseps ile kavrayın ve alt ekstremitenin alttaki kas karınlarını açığa çıkararak cildi ve fasyayı nazikçe çıkarmak için kavisli ince makası kullanın.
4. Posterior alt ekstremitedeki gastroknemius kasını, posterior femur üzerindeki lateral ve medial kondillerdeki kökeni ve kalkaneal tendon yoluyla kalkaneusa yerleştirilmesi ile tanımlayın.
   1. Gastroknemius kalkaneal tendonu kesmeye devam edin. Gastroknemiusun distal ucunu Dumont forseps ile kavrayın ve kas göbeğini kökenine doğru çekin. Makas kullanarak, kası orijinde femura mümkün olduğunca yakın bir şekilde kesin. Kası bir tabağa koyun. Hemen tartın ve sıvı nitrojen içinde bir tüpte dondurun.
      not: Gastroknemius ile birlikte soleus kasını eksize etmediğinizden emin olun. Böyle bir durumda, forseps ile nazikçe çekerek soleus'u dikkatlice çıkarın.
5. Tibialis anterior kasını, tibianın anterolateral yüzeyindeki kökeninden ve distal tendonu yoluyla medial çivi yazısına yerleştirilmesinden tanımlamaya ve eksize etmeye devam edin.
   1. Kaldıraç elde etmek için işaret parmağı ve başparmağınızla rakamları kavrayarak ayağınızı tutun. Dumont forsepslerinin ucunu tibialis yüzeysel distal tendonunun hemen altına yerleştirin ve forsepsleri, künt taraf tibialis kası göbeğini alttaki bağ dokusundan ayırmak için kullanılabilecek şekilde hareket ettirin.
   2. İnce kavisli makası kullanarak distal tendonu kesin ve ardından kası orijinden tibiaya mümkün olduğunca yakın bir yerden kesin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
CD2F1 fareler	Harlan	60
Anestezi aparatı	EZ-Anestezi	EZ-7000 Serisi
Ekim	Doku-Tek	4583
Kriyostat	Leica Belediyesi	CM1850
Mantar diskler	Elektron Mikroskobu Bilimleri	63305
Mikro tutucu	Bd	365873
Superfrost artı cam kaydıraklar	VWR (VWR)	48311-703
Streptomisin-Penisilin	Hücre Kanalı	30-002-CI

Serisi