Fare bağırsağının tüm montaj hazırlığı: tüm montajı hazırlamak için basit bir bağırsak kesme cihazı kullanma

Özet

Kaynak: Yoneda, M. et al. Fare bağırsağının tüm montajlarını hızla hazırlamak için basit bir cihaz. J. Vis. Uzm. (2015)

Bu videoda, basit bir bağırsak kesme cihazı kullanarak fare bağırsağının tüm montaj hazırlığını gösteriyoruz. Elde edilen bağlar üstün ve homojen kalitededir ve histolojik analizler için kullanılabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Cihaz

1. Cihazın tabanının ana kısmını, bu el yazmasında açıklandığı gibi, katı bir yüksek yoğunluklu asetil reçine bloğundan işleyin. Her iki uçta, 3 mm yüksekliğinde şeritler oluşturun ve çubukları almak için bu 2.5 mm'lik oluklardan makine ayırın (bkz. Şekil 1 ve Şekil 2).
2. Uçları yuvarlatılmış 2,4 mm çapında paslanmaz çelikten çubuklar yapın.
not:Kapağın ana çerçevesi Duralumin plakadan işlendi.

2. Cihazın Kullanımı

1. Makas ve eldivenli parmaklar kullanarak ince bağırsağı ve kolonu karın boşluğundan çıkarın. Meenteri kavisli forsepslerle tutarak ve yavaşça bağırsaktan çekerek çıkarın.
2. Bağırsakları, 10 veya 20 mL luer uyumlu plastik bir şırıngaya sığabilmesi için daha geniş ucundan kesilmiş Gilson tipi bir pipet ucu kullanarak soğuk fosfat tamponlu tuzlu su ile (PBS, pH 7.4) durulayın.
3. İnce bağırsağı (SB) bir kağıt havlu tabakasına yerleştirin ve makas kullanarak uzunlukta üç eşit bölüme (proksimal, orta ve distal - SB1, SB2 ve SB3) bölün. Çekumu çıkarın ve kolonu yerleştirin.
4. Sıvının kaçmasına izin vermek için bağırsak segmentlerine makasla çok küçük birkaç kesik yapın ve bağırsakların üzerine bir yaprak kağıt havlu yerleştirin ve sıvıyı sıkmak ve kurulamak için müstahzarların üzerinde parmağınızı nazikçe gezdirin.
5. Bölümleri kaldırın ve daha önce fosfat tamponlu tuzlu su kabına batırılarak ıslatılmış paslanmaz çelik çubukları yerleştirin.
   not: İstenirse bağırsak ters çevrilebilir (ters çevrilebilir).
6. Cihazın tabanına sığacak şekilde kesilmiş bir kart parçasını veya filtre kağıdını etiketleyin. Kalem en iyisidir, çünkü hemen hemen tüm çözümlerden etkilenmez. Otopsi tarihi, deney kodu ve hayvan kimlik numarası önerilir.
7. Kartı veya filtre kağıdını cihazın tabanına yerleştirin. Çubukları ve bağırsakları cihazın tabanındaki yuvalara yerleştirin. Segmentlerin proksimal ucunun standart bir şekilde konumlandırıldığından emin olun. Proksimal uçlar kart etiketlerinin yanında olmalıdır.
8. Cihazın üst parçasını tabanın üzerine yerleştirin. Bölümleri uzunlamasına kesmek için bir neşter bıçağını yönlendirmek için açılı çubukları kullanın.
   not: Dokunun bıçakla hareket etmemesini sağlamak için parmakla nazikçe ve dikkatlice tutulması yardımcı olur.
9. Cihazın üst parçasını çıkarın. Filtre kağıdını ve mendilleri dikkatlice çıkarın (hala çubuklarının üzerinde).
   not: Filtre kağıdının altına yerleştirilmiş sert bir kart parçası, kaldırmaya yardımcı olacaktır.
10. Hafifçe ıslak (eldivenli bir parmak ucu PBS'ye batırılmış) segmentler. Bağırsağı açmak ve düz bir şekilde yaymak için çubuğu yan yana yuvarlayın. Mendil daha sonra filtre kağıdına yapışacaktır.
11. Herhangi bir brüt lezyon için hazırlıkları görsel olarak inceleyin.
12. Filtre kağıdına yapıştırılan dokuyu sabitleyici içeren sığ bir banyoya (veya sandviç kutusuna) aktarın.
    not: Mendil filtre kağıdına veya karta yapıştıktan sonra sıkıca bağlı kalacaktır. Preparasyonu korumak için çok çeşitli fiksatifler kullanılabilir. En iyi hücre proliferasyon yöntemleri için ideal fiksasyon olan bağırsak hücresi proliferasyonunun incelenmesi için Carnoy sıvısının kullanılması önerilir; Bununla birlikte, diğer uç noktalar gerekiyorsa formalin veya diğer birçok fiksatif de kullanılabilir.
13. Fiksasyondan sonra (genellikle 3 saat), preparatları% 70 etanole aktarın. Numuneler daha sonra gerekli olana kadar saklanabilir. Preparatlar yüz yüze incelenebilir ve/veya H&E veya diğer histolojik boyama teknikleri, immünohistokimya ve/veya in situ hibridizasyon için histolojik örneklerin hazırlanmasında kullanılabilir.
    not: Uzun süreli fiksasyon, immünohistokimyasal reaktiviteyi ve / veya in situ hibridizasyon reaktivitesini azaltabilir. Polipropilen sandviç kutuları, çok sayıda müstahzarı saklamak için idealdir.
14. Gerekirse, çeşitli bağırsak segmentlerinden alınan sabit dokular 'İsviçre ruloları' haline getirilebilir ve yukarıda tarif edilenler de dahil olmak üzere tüm histolojik yöntemlerle boyanabilir. Bir 'İsviçre rulosu' yapmak için bağırsak segmentleri filtre kağıdından çıkarılır, bir kokteyl çubuğu veya bir kürdan etrafına sarılır, entomolojik bir pim ile sabitlenir ve balmumu gömme için işlenir.
15. Gerekirse, anormal kript odaklarını görselleştirmek için toplu dokuyu metilen mavisi ile boyayın.
16. Boş zamanlarında sabit hazırlıkları puanlayın.

Sonuçlar

Şekil 1. Orijinal cihazın fotoğrafları.Orijinal cihaz, elle hazırlanan birkaç metal parçasından yapılmıştır. (A) Cihaz monte edildi. (B) Çubukların yerinde olduğunu göstermek için cihazın üst kısmı çıkarılmıştır.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Delrin Belediyesi	Ryan Plastik, Earls Barton, Birleşik Krallık		Yüksek yoğunluklu asetal reçine benzeri malzeme yeterli olacaktır
Duralumin plaka	Metal Malzemeleri Ltd, Park Yolu, Dukinfield. SK16 5LP İNGİLTERE		Alüminyum, 1909'a kadar uzanmaya izin verir, bu nedenle alternatif tedarikçiler mevcuttur
Bitmiş cihaz(lar) kullanıma hazır	Dr Goodlad ile iletişime geçin r.goodlad@imperial.ac.uk		Tedarik detayları için r.goodlad@imperial.ac.uk ile iletişime geçin