Murin Modelinde Kanser Hücrelerinin İntramukozal Aşılanması: Ortotopik Bir Baş ve Boyun Kanserli Fare Modeli Oluşturma Prosedürü

Özet

Kaynak: Oweida, A. J. et al. Tümör bağışıklık profili oluşturma ve tedavi yanıtı değerlendirmesi için farelerde skuamöz hücreli karsinom hücrelerinin intramukozal inokülasyonu. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, skuamöz hücreli karsinom hücre hattının intramukozal inokülasyonu ile ortotopik bir baş ve boyun kanseri murin modeli geliştiriyoruz. Tümör taşıyan fare, insan hastalığının klinik olarak ilgili semptomlarına benzerlik gösterir ve bu nedenle kanserin ilerlemesini incelemek ve yeni terapötik stratejiler keşfetmek için kullanılabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Farelere Hücre Enjeksiyonu

1. 1:1 hücre karışımı hazırlayın: bazal membran matrisi (her biri 50 μL).
2. Önce hücreleri ekleyin; Ardından, bazal membran matrisini yavaş yavaş pipetleyin. Hava kabarcıkları sokmaktan kaçının. Karışımın hayvan enjeksiyonundan hemen önce yapıldığından emin olun. Hücrelerin bazal membran matrisine uzun süre eklenmesi, hücrelerin matris karışımına yerleşmesine neden olabilir, bu da karışımın kuvvetli bir şekilde çalkalanmasını zorlaştırır. Bu, fareler arasında tümör boyutunda önemli değişkenliğe neden olacaktır.
3. Yavaşça karıştırın. Matris içeren tüm adımların buz üzerinde gerçekleştirildiğinden emin olun. Bodrum membran matrisi oda sıcaklığında polimerize olacaktır.
4. Aşılama için şırıngalar hazırlayın.
5. 0.5 mL insülin şırıngalarını (23G) 100 μL hücre / bazal membran matris çözeltisi ile yükleyin.
6. Bazal membran matris polimerizasyonunu önlemek için şırıngaları buz üzerinde tutun.
7. Fareleri izofluran ve oksijen (% 2.5) içeren bir odaya yerleştirerek uyuşturun.
8. Enjeksiyonu gerçekleştirmeden önce farelerin derinlemesine uyuşturulduğundan emin olun (ayak parmağı sıkışmasına yanıt verilmemesini sağlayarak).
9. İğneyi sağ veya sol bukkal bölgeye yerleştirin. Bu, ağzın her iki tarafındaki mevcut açık alandan gerçekleştirilir.
10. Farenin dilinin engel olmadığından emin olun.
    NOT: Dili dürtmek kolaydır, bu da dil tümörlerine neden olur. Gerekirse dili karşı tarafa hareket ettirin.
11. Ağız boşluğunun içindeyken şırıngayı bukkal bölgeye paralel tutun.
12. Enjekte etmeye hazır olduğunuzda, şırıngayı geri çekin ve şırıngayı yavaşça 10° açıyla yerleştirin.
13. 5 s'lik bir süre boyunca 100 μL hücre / bazal membran matris süspansiyonu enjekte edin.
14. Tüm malzemenin enjekte edildiğinden emin olmak için şırıngayı 5 saniye daha yerinde tutun.
    NOT: Tümör taşımayan fareleri kontrol etmek için, tümör hücreleri olmadan serumsuz ortam ve matris (yukarıda açıklandığı gibi) bir karışım enjekte edin.
15. Şırıngayı yavaşça çekin.
16. Kalan farelerle yukarıdaki işleme devam edin.
17. Tümörler büyük ölçüde ortaya çıkmaya başlayana kadar 1 hafta bekleyin (B4B8 ve LY2 hücreleri için 50-200 mm³).

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
HBSS (Türkçe)	ThermoFisher Bilimsel	14175079	Kalsiyum yok, magnezyum yok, feno kırmızısı yok
Helois kütle sitometresi	Akışkan	Na
Matrigel membran matrisi	Corning	CB-40234B