RNA In Situ Hibridizasyonda Prob Hibridizasyonu ve Sinyal Amplifikasyonu: Doku Kesitlerinde Spesifik RNA Dizilerini Tespit Etmek İçin Bir Teknik

Özet

Kaynak: Outh-Gauer, S. et al. HPV ile İlişkili Baş ve Boyun Kanseri Teşhisi için Bir Araç Olarak Kromojenik İn Situ Hibridizasyon. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, mRNA problarının belirli hedef mRNA'ya hibritleştirilmesini içeren sıralı bir hibridizasyon stratejisi açıklanmaktadır. Prob hibridizasyonunu takiben, histolojik numunelerin RNA-CISH sırasında sinyal-gürültü oranının azaltılması yoluyla çözünürlüğü artırmak için sinyal amplifikasyonu gerçekleştirilir.

Protokol

İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Testi Çalıştırma

NOT: İnkübasyon adımları arasında bölümlerin kurumasına izin vermeyin.

1. HPV probunun hibridizasyonu
   NOT: Kullanmadan önce herhangi bir yağışı çözmek için probların önceden ısıtıldığından emin olun. Bu adım için, HPV probu yerine, pozitif kontrol için peptidil-prolil izomeraz B (PPIB) veya negatif kontrol için dihidrodipikoli....

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
HybEZ Fırın (110v)	Gelişmiş Hücre Teşhisi A.Ş.	321710
HybEZ sürgülü raf	Gelişmiş Hücre Teşhisi A.Ş.	300104
RNAscope 2.5 HD Tespit Reaktifleri-KAHVERENGİ	Gelişmiş Hücre Teşhisi A.Ş.	322310	Bu kit, amplifikasyon reaktifleri AMP1, AMP2, AMP3, AMP4, AMP5 ve AMP6 ve tespit reaktifleri DAB-A ve DAB-B'yi içerir
RNAscope 3-Plex Negatif Kontrol Probu	Gelişmiş Hücre Teşhisi A.Ş.	320871	DAPB (DAPB)
RNAscope 3-Plex Pozitif Kontrol Probu	Gelişmiş Hücre Teşhisi A.Ş.	320861	PPIB (ÜİB
RNAscope Probu- HPV16/18	Gelişmiş Hücre Teşhisi A.Ş.	311121
RNAscope Yıkama Tamponu Reaktifleri	Gelişmiş Hücre Teşhisi A.Ş.	310091	Yıkama Tamponu 50X x4

)