İnsan katılımcıları içeren tüm prosedürler, insan refahı için kurumsal, ulusal ve uluslararası yönergelere uygun olarak gerçekleştirilmiş ve yerel kurumsal inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Testi Çalıştırma
NOT: İnkübasyon adımları arasında bölümlerin kurumasına izin vermeyin.
- HPV probunun hibridizasyonu
NOT: Kullanmadan önce herhangi bir yağışı çözmek için probların önceden ısıtıldığından emin olun. Bu adım için, HPV probu yerine, pozitif kontrol için peptidil-prolil izomeraz B (PPIB) veya negatif kontrol için dihidrodipikolinat redüktaz (DAPB) da kullanılabilir (Malzeme Tablosuna bakınız).
- Fazla sıvıyı çıkarmak için kızaklara dokunun ve/veya hafifçe vurun ve bunları sürgü rafına yerleştirin. Her bölümü tamamen kaplayacak şekilde ~ 4 damla HPV probu ekleyin.
- Tepsiyi bir kapakla kapatın ve 40 °C'de 2 saat fırına koyun.
NOT: Buharlaşmayı önlemek için, çevirme düğmesinin tamamen kilit konumuna çevrildiğinden emin olun.
- Tepsiyi fırından çıkarın ve sürgülü rafı çıkarın.
- Her seferinde bir slayt, fazla sıvıyı hızlı bir şekilde çıkarın ve slaytı 1x yıkama tamponu ile doldurulmuş bir boyama kabına batırılmış bir sürgülü rafa yerleştirin.
- Slaytları 1x yıkama tamponunda oda sıcaklığında 2 dakika boyunca sürekli çalkalayarak yıkayın. Bunu taze 1x yıkama tamponu ile tekrarlayın.
- AMP1, AMP2, AMP3 ve AMP4
'nin hibridizasyonu.
NOT: Bu adımlar, hibridizasyon fırınında hibridizasyonun yanı sıra satın alınan kitten AMP1–AMP4'ü içerir (Malzeme Tablosuna bakın).
- Slaytlardaki fazla sıvıyı çıkarmak ve bunları sürgülü rafa yerleştirmek için dokunun ve/veya hafifçe vurun. Her bölümü tamamen kaplamak için ~ 4 damla AMP1 ekleyin.
- Tepsiyi bir kapakla kapatın ve 40 °C'de 30 dakika fırına koyun.
- Tepsiyi fırından çıkarın ve sürgülü rafı çıkarın.
- Her seferinde bir slayt, fazla sıvıyı hızlı bir şekilde çıkarın ve slaytı 1x yıkama tamponu ile doldurulmuş bir boyama kabına batırılmış bir sürgülü rafa yerleştirin.
- Slaytları 1x yıkama tamponunda oda sıcaklığında 2 dakika boyunca sürekli çalkalayarak yıkayın. Bunu taze 1x yıkama tamponu ile tekrarlayın.
- 1.2.1–1.2.5 adımlarını tekrarlayın, ancak AMP1 yerine ~4 damla AMP2 kullanın ve 40 °C'de 15 dakika inkübe edin. Slaytları 2 kez 2 dakika, her iki seferde de taze yıkama tamponunda yıkayın.
- 1.2.1–1.2.5 adımlarını tekrarlayın, ancak AMP1 yerine ~4 damla AMP3 kullanın ve 40 °C'de 30 dakika inkübe edin. Slaytları 2 kez 2 dakika, her iki seferde de taze yıkama tamponunda yıkayın.
- 1.2.1–1.2.5 adımlarını tekrarlayın, ancak AMP1 yerine ~4 damla AMP4 kullanın ve 40 °C'de 15 dakika inkübe edin. Slaytları 2 kez 2 dakika, her iki seferde de taze yıkama tamponunda yıkayın.
- AMP5 ve AMP6
'nin hibridizasyonu.
NOT: Bu adımlara fırında hibridizasyon değil, oda sıcaklığında hibridizasyon dahildir. AMP5 ve AMP6, satın alınan kitten gelir (Malzeme Tablosuna bakın).
- Fazla sıvıyı çıkarmak için kızaklara dokunun ve/veya hafifçe vurun ve bunları sürgü rafına yerleştirin. Her bölümü tamamen kaplamak için ~ 4 damla AMP5 ekleyin.
- Tepsiyi bir kapakla kapatın ve oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin.
- Her seferinde bir slayt, fazla sıvıyı hızlı bir şekilde çıkarın ve 1x yıkama tamponu ile doldurulmuş bir boyama kabına batırılmış bir sürgülü rafa yerleştirin.
- Slaytları 1x yıkama tamponunda oda sıcaklığında 2 dakika boyunca sürekli çalkalayarak yıkayın. Bunu taze 1x yıkama tamponu ile tekrarlayın.
- 1.3.1–1.3.4 adımlarını tekrarlayın, ancak AMP5 yerine ~4 damla AMP6 kullanın ve oda sıcaklığında 15 dakika inkübe edin. Slaytları 2 kez 2 dakika, her iki seferde de taze yıkama tamponunda yıkayın.
