Civciv Korioallantoik Membran Hasadı: Tavuk Yumurtasından Tümör Grefti Taşıyan Korioallantoik Membranı İzole Etmek İçin Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Schmidt, L. B. et al. Baş ve Boyun Kanserinde Perinöral İnvazyonu Değerlendirmek için Civciv Korioallantoik Membran İn Vivo Model. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, tümör taşıyan koryoallantoik membranın tavuk embriyosundan izolasyonunu göstermektedir. Hasat edilen CAM, daha sonraki sonraki uygulamalar için kullanılabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. CAM'ın hasat edilmesi

1. % 4 PFA (paraformaldehit) pH 7.0 olan 6 oyuklu plakalar hazırlayın; yumurta başına bir kuyu, oyuk başına 2 mL.
2. Yumurtaları bir laboratuvar tezgahına getirin. Film sargısını delmek için bir şırıngaya bağlı bir iğne kullanarak, CAM'ı hafifçe sertleştirmek için CAM'ın üzerine yaklaşık 300 μL PFA bırakın, böylece hasat işlemini kolaylaştırın. Bunu tüm yumurtalar için tekrarlayın.
3. Bir makasla, yumurta kabuğunun üst yarısını (çalıştırma penceresinin bulunduğu yer) CAM takılıyken çıkarın (Şekil 1I). Bu yarının boyutunu yaklaşık 3 cm çapa düşürün. CAM'yi ince forseps ile kavrayın ve PFA'ya yerleştirirken yumurta kabuğundan ayırın.

Sonuçlar

Şekil 1: DRG'nin, hücrelerin aşılanması ve CAM'ın toplanması: 8. günde: A. CAM, parafin mumu zarının çıkarılmasından sonra kolayca gözlenir. M.Ö. İnce forsepslerle DRG, CAM üzerine yerleştirilir. Yumurta film pansuman ile kaplanır ve kuluçka makinesine konur; Oklar, kapatılan açıklıkları gösterir. 10. günde: E-F. Film sargısı çıkarılır ve ...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
PFA (paraformaldehit çözeltisi)	Sigma-Aldrich	# P6148-1KG	% 4'lük bir PFA çözeltisi elde etmek için suyla seyreltin
İnce cerrahi düz keskin makas	Güzel Bilim Araçları (FST)	#14060-09	17. günde CAM dokusunu hasat etmek için kullanılır
Döllenmiş Lohmann Beyaz Leghorn yumurtaları			Erken döllenme günlerinde, tercihen döllenmeden sonraki ilk gün döllenmiş yumurtalar. Bu protokolde kullanılan yumurtalar Michigan Eyalet Üniversitesi Tavuk Çiftliği'ndendir
Ekstra ince Graefe forseps, düz	Güzel Bilim Araçları (FST)	# 11150-10	8. günde DRG'yi CAM'a aşılamak ve 17. günde CAM dokusunu hasat etmek için kullanılır

Gazetesi