Tiroid Kanseri Hücrelerinin Murin Tiroidine Ortotopik Aşılanması: Ortotopik Tiroid Kanseri Fare Modeli Oluşturma Prosedürü

Özet

Kaynak: Julia Ramirez-Moya, et al. Farelerde Tümör Büyümesini Azaltmak için MikroRNA'nın İn Vivo İnhibisyonu. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, tiroid kanseri hücrelerinin fare modellerinin tiroid bezine ortotopik olarak aşılanması prosedürü açıklanmaktadır, bu da daha sonra karsinogenezi değerlendirmek ve potansiyel tedavi stratejilerini keşfetmek için değerli bir platform görevi görebilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

>1. Hücrelerin Tiroid Ortotopik Aşılanması

1. Hücre hazırlığı
   1. GFP ve lusiferazı yapısal olarak eksprese eden transgenik bir yapıyı aşırı eksprese etmek için bir Cal62 insan tiroid kanseri hücre hattı tasarlayın. Transgenik hücreleri antibiyotik direncine göre veya GFP pozitif hücreleri akış sitometrisi ile sıralayarak seçin.
   2. Bu hücreleri antibiyotikler (penisilin ve streptomisin) ve 37 ° C'de% 10 FBS ve% 5 CO₂ ile desteklenmiş DMEM'de büyütün.
   3. 5 μL PBS'de 1 x 10⁵ hücreyi askıya alın.
2. Farelerin tiroid bezine hücre aşılaması
   1. 100 μL analjezik (buprenorfin) ve 100 μL antibiyotik (sefalosporin) 7 haftalık BALB/c nu/nu farelerine deri altına enjekte edin. Enjeksiyon bölgesini alkolle dezenfekte edin.
   2. Farelerin tiroid bezine 5 μL hücre çözeltisi enjekte edin.
      1. Fareyi oksijenle karıştırılmış %3 izofluran kullanarak uyuşturun ve steril bir akış kabinine stereomikroskop altına yerleştirin. Pedal refleksi (sert ayak parmağı çimdikleme) ile anestezi seviyesini değerlendirin ve cerrahi düzlemi korumak için anestezik uygulamayı uygun şekilde ayarlayın.
      2. Kurumayı önlemek için her iki göze de oftalmik merhem sürün.
      3. Her fare için boynu iyodopovidon ile dezenfekte edin ve makasla deride yaklaşık 2 cm'lik bir kesi yapın. Açıldıktan sonra, tükürük bezlerini yerinden çıkararak boynu açığa çıkarın.
      4. Trakea ve tiroid bezini ortaya çıkarmak için diseksiyon forseps ve/veya makas kullanarak kayış kaslarını inceleyin. 10 μL'lik bir şırınga kullanarak, 5 μL hücre solüsyonunu krikoid kıkırdağın yanında bulunan sağ tiroid lobülüne enjekte edin.
      5. Tükürük bezlerini yeniden konumlandırın ve örgülü, kaplamalı, emilmeyen dikişler kullanarak kesiği ipekle dikin.
      6. Yara bölgesine iyodopovidon ekleyin ve anesteziden iyileşirken fareyi termik bir battaniyenin üzerine yerleştirin.
   3. Ameliyattan sonraki ertesi gün, deri altına analjezik (buprenorfin) enjekte edin ve 1 hafta boyunca 250 mL içme suyuna 3 mL sıvı ibuprofen (40 mg / mL) ekleyin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Bodrum Membran Matrisi: Matrigel Bodrum Membran Matrisi Yüksek Konsantrasyon	Corning	#354248
İn vivo dağıtım reaktifi: Invivofectamine 3.0 Reaktifi	Termo Balıkçı	IVF3005
In vivo görüntüleme yazılımı: IVIS-Lumina II Görüntüleme Sistemi	Kumpas Yaşam Bilimleri