3D sferoidlerin agaroz jel damlalarına gömülmesi: Aşağı akış analizi için sferoidleri korumak için bir teknik

Özet

Kaynak: Rolver, M. G. et al. Kanser Hücrelerinin 3B Küresel Kültürlerinde Hücre Canlılığının ve Ölümünün Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, koruma amacıyla agaroz jel damlalarına 3D sferoidleri yerleştirme tekniği açıklanmaktadır. Gömülü 3D sferoidler, aşağı akış analizi için daha fazla kullanılabilir.

Protokol

1. 3D Sferoidlerin Gömülmesi

1. Sferoidlerin gömülü olduğu agaroz jeli hazırlayın (sadece protokolü ilk kez gerçekleştirmek için gereklidir)
   1. 1 g bacto-agar'ı 50 mL ddH₂O içinde karıştırın.
   2. Pastırma-agar eriyene ve homojen bir jel oluşana kadar mikrodalga fırında yavaşça ısıtın. Jelin kaynamasına izin vermeyin.
   3. Bacto-agar'ı 60 °C'lik bir su banyosunda sıcak tutun.
   4. Deneyler arasında 4 °C'de tutun.
2. Sferoidlerin gömülmesi
   1. 1. günde, her koşul için 1,5 mL'lik bir tüpte en az 12 sferoid toplayın.
   2. 1 mL buz gibi soğuk 1X PBS ile bir kez yıkayın.
   3. Sfer....

Sonuçlar

Şekil 1: Sferoidlerin fiksasyonu, gömülmesi ve immünohistokimya analizi. (A) Sferoidlerin gömülmesi için protokolün şematik gösterimi. Bireysel adımlar (i-vii) olarak işaretlenmiştir. (B) Gömülü MDA-MB-231 küresinin görüntüsü. Ölçek çubuğu: 50 μm. (C) P-53'e karşı antikorlarla IHC analizine tabi tutulan kemoterapi ile teda.......

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Bactoagar Belediyesi	BD Biyobilim	#214010	Agaroz jel hazırlama için kullanılır
Formaldehit	VWR Kimyasalları	#9713.1000	Hücre fiksasyonu için kullanılır
Medim Uni-güvenli kaset	Medim Histotechnologie	10-0114	Gömülü sferoidlerin depolanması için kullanılır
Superfrost Ultra-Plus Yapışma kaydırağı	Menzel-Gläser	#J3800AMNZ	Gömme için kullanılan mikroskop cam slayt
CellTiter-Glo 3D Hücre Canlılık Testi	Promega	#G9681	Hücre canlılığı testi için kullanılır

Fuar