Omurilik Ekstraksiyonu: İn Vitro Çalışmalar için Murin Omuriliğini İzole Etmek İçin Bir Protokol

Özet

Kaynak: Na'ara, S. et al. Kanserli Nöral İstilanın İn Vitro Modellemesi: Dorsal Kök Ganglion Modeli. J. Vis. Uzm. (2016)

Bu videoda, in vitro çalışmalar için omuriliği bir fare modelinden izole etmek için adım adım bir protokol açıklıyoruz.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Omuriliğin Çıkarılması

1. Bir CO₂ odası kullanarak fareyi ötenazi yapın. Kesme kuvvetleri nedeniyle ganglion köklerine zarar verebileceğinden servikal çıkıktan kaçının. Bundan sonra tüm adımları steril koşullar altında gerçekleştirin.
2. Hayvanı% 70 etanol ile ıslatın. Bu adım, sterilizasyon ve saçın iç organlardan sürüklenmesini önlemek için önemlidir.
3. Fareyi etanolden kurumaya bırakın. Nörotoksisite nedeniyle etanolün iç organlarla herhangi bir temasını önleyin.
4. Fareyi kuruttuktan sonra, yüzüstü pozisyonda (yüzü aşağı bakacak şekilde) pimleri kullanarak konumlandırın. Pimleri her bir arka bacak ve ön ayağa yerleştirin.
5. Forseps kullanarak, arka boyundan lomber omurgaya kadar kraniyokaudal olarak uzanan bir orta hat kesisi yapın. Daha sonra, forseps kullanarak dermal flepleri bilateral olarak kaldırın ve deri altı dokusunu açığa çıkarın.
6. Kraniyoservikal kavşağa ulaşana kadar fare kafatasını palpe edin. Hayvana dik makas kullanarak, ağır forseps kullanarak kraniyoservikal kavşakta (7. servikal omurlar) servikal kasları ve omurgayı kesin. Omurgayı kaudal olarak inceleyin ve bel seviyesine ulaşana kadar (arka bacaklar seviyesi) omurgayı ağır forseps ile eksize edin.
7. Ağır forseps kullanarak lomber omurga seviyesinde (5. bel omurları) tam bir kaudal transeksiyon gerçekleştirin.
8. Fareyi üzerine getirin (yüzü yukarı bakacak şekilde). DRG rahim ağzından değil daha düşük vertebral seviyelerden çıkarıldığı için insizyonun kapatılmasına gerek yoktur.
9. Boyundan karına kadar orta hatta kesin, cildi yanal olarak geri çekin ve ardından peritonu açmak için kesin.
10. Karın zarının içindeki iç organları (karaciğer, dalak, pankreas, mide ve bağırsak) blok halinde çıkarın. Ardından, retroperitoneal organları çıkarın (yani böbrekler ve pankreas). Kraniyal olarak, göğüs duvarını açın.
11. Forseps ve cerrahi bir bıçak kullanarak, kaburgaları kesin ve 5 mm kaburgaları vertebral kolondan iki taraflı olarak uzakta bırakın. Bu noktada, vertebral kolon vücudun geri kalanından ayrılır.
12. Vertebra kolonu kandan soğuk (4 °C) taze fosfat tamponlu salin (PBS) ile iki kez yıkayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Forseps	Sigma-Aldrich	F4142
Cerrahi bıçak	Sigma-Aldrich	Z309036
makas	Sigma-Aldrich	S3271 Serisi
35 mm Petri kapları, cam tabanlı	de groot	60-627860
% 70 etanol	Sigma
Soğuk PBS	Biyolojik endüstriler	02-023-1A

Gazetesi Serisi Gazetesi Gazetesi