DAPI Boyama Kullanılarak Hücre Ölümü Taraması: Kanserli Hücre Hatlarında IR ile İndüklenen Klonojenik Hücre Ölümünün Hızlı Taraması İçin Bir Yöntem

Abstract

Kaynak: Kobayashi, D. et al. Floresan Mikroskobu ile Radyasyona Bağlı Klonojenik Hücre Ölümü Modunun Değerlendirilmesi için Tek Adımlı Protokol. J. Vis. Uzm. (2017)

Bu video, DAPI boyama testi kullanarak iyonlaştırıcı radyasyonun (IR) neden olduğu kanser hücre hatlarında ana hücre ölümü profillerini tarama metodolojisini göstermektedir. Hücre ölümü geçiren hedef hücrelerin DAPI ile boyanmış çekirdekleri farklı morfolojiler sergiler ve floresan mikroskobu ile kolayca tanımlanabilir.

Protocol

1. Malzemelerin Hazırlanması

1. Otoklav lameller
   1. Lamelleri bir cam kabın içine yerleştirin.
   2. Cam kabı folyo ile örtün.
   3. 121 °C'de 15 psi'de 20 dakika otoklav.
   4. 50 °C'de kurutun. Oda sıcaklığında bir kültür davlumbazında saklayın.
2. Fiksasyon Çözeltisini Hazırlayın: Fosfat tamponlu salin (PBS) içinde% 3 paraformaldehit +% 2 sükroz
   1. 1.000 mL'lik bir cam şişeye 700 mL PBS ve 30 g paraformaldehit ekleyin.
      Dikkat: Paraformaldehit aşındırıcıdır, uygun eldiven giyin.
   2. Paraformaldehiti bir mikrodalga kullanarak 80 °C'ye ısıtarak tamamen çözün....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Kapak fişi	Matsunami	C013001
Paraformaldehit	Sigma-Aldrich	P6148-1KG
Sakaroz	Sigma-Aldrich	84097-250G
Fosfat tamponlu tuzlu su	Cosmo Biyografi	16232000
neşter	Kai Medikal	No.20, 520-A
35 mm hücre kültürü kabı	doğan	353001
Ters Faz Mikroskobu	Şimazu	114-909
X-ışını ışınlayıcı	Faxitron Biyotik	Faxitron RX-650
Kare Kültür Tabağı	Corning	431110
sürgülü cam	Matsunami	Pro-11 (İngilizce
DAPI boyama reaktifi	Hücre Sinyalizasyonu	8961S
Floresan mikroskobu	Nikon	TUTULMA Ni
floresan mikroskobu DAPI filtresi	Nikon	U-FUW, BP340-390, BA420IF, DM410
floresan mikroskop lensi (20×)	Nikon	Plan Apo λ 20X/0.75
Floresan Mikroskop Lensi (60×, Yağ)	Nikon	Plan Apo λ 60X/1.40 yağ
yağ	Olympus	N5218600
CCD kamera	Nikon	DS-Qi2
Dijital Görüntü Elde Etme Yazılımı	Nikon	NIS-Elements Belgesi
Lens temizleyici	Olympus	OT0552
kloroform	Wako (Vahşi)	035-02616