Karanlık Alan Mikroskobu Kullanılarak Antikor Konjuge Nanopartikül Tabanlı Miktar Tayini: Vücut Sıvılarından Belirli Eksozomları Yakalama ve Ölçme Prosedürü

Abstract

Kaynak: Wan, M. et al. Tümörden türetilmiş eksozomları ölçmek için nanoplazmonla geliştirilmiş saçılma ve düşük büyütmeli mikroskop görüntülemeyi kullanma. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu videoda, küçük hacimli biyoakışkan numunelerdeki belirli eksozomları ölçmek için düşük büyütmeli, karanlık alan mikroskobunun kullanımı açıklanmaktadır. Bu şekilde tanımlanan eksozomlar, potansiyel kanser biyobelirteçleri olarak hizmet edebilir.

Protocol

1. Nanoparçacık Problarının Hazırlanması

>NOT: Bu test, nötravidin polimerleri (AV) ile kovalent olarak konjuge edilen ve DFM aydınlatması üzerine kırmızı (641 nm tepe) saçılma sinyali üreten bir yüzey plazmon rezonans zirvesine sahip İşlevselleştirilmiş Altın Nanoçubukları (AuNR'ler; 25 nm çap x 71 nm uzunluk) kullanır.

1. 40 μL AuNR-AV'yi (2.56 x 10¹¹ parçacık) 200 μL PBS (pH 7.0) ile santrifüjleme ve aspirasyon (10 dakika boyunca 4 ° C'de 8.500 x g) ile üç kez yıkayın, ardından son bir santrifüjleme ve aspirasyon adımı izleyin, ardından AuNR-AV peleti 40 μL PBS'de süspanse edi....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Eppendorf Tekrarlayıcı akışı	Balıkçı Bilimsel	05-401-040
Eppendorf Araştırma Artı	Eppendorf Belediyesi	3120000011	0,1 – 2,5 μL, koyu gri
İşlevselleştirilmiş Altın Nanoçubuklar	Nano Parçacık	C12-25-650-TN-DIH-50-1	İn vitro nötravidin polimeri İşlevselleştirme
HulaMixer Numune Mikseri	Thermo Fisher Bilimsel	15920D
Incu-çalkalayıcı 10L	Kıyaslama Bilimsel	H1010
Ters Araştırma Mikroskobu	Nikon	Ti-DH (Ti-DH	Karanlık alan kondansatörlü, DS-Ri2 kamera ve Ti-SH-U evrensel tutucu ve motorlu sahne
NIS Elemanları	Nikon		Mikroskop görüntüleme yazılımı
Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (1X)	GE Sağlık Yaşam Bilimleri	SH30256.02	HyClone (Klon
Protein A / G İşlem Görmüş Cam Yüzey Slaytları	Arrayit A.Ş.	AGMSM192BC	Birinci sınıf mikrodizi alt tabaka
Q500 Sonikatör	Qsonica, LLC	Q500-110	Standart prob ile (#4220)
Süper blok engelleme tamponu	Termo Bilimsel
TWEEN 20	Sigma Yaşam Bilimleri	9005-64-5