Fareden Sağlam Böbreğin Çıkarılması: Murin Modellerinden Böbrek Kapsülü Olmadan Böbrek Elde Etme Tekniği

Özet

Kaynak: Grainger, N. et al. Fare Renal Pelvisinin Canlı, Sağlam Kalp Pili Bölgelerinin Vibratom Kesiti ile İzole Edilmesi ve Görüntülenmesi. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu videoda, farenin retroperitoneal boşluğundan böbrek çıkarma prosedürünü açıklıyoruz. Çıkarılan böbrek, böbrek kapsülü ve çevresindeki yağ tabakası olmadan sağlam bir böbrek elde etmek için ayrıca mikrodiseke edilebilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Böbrek Diseksiyonu

1. Havalandırmalı bir başlıkta% 3-4 izofluran soluyarak fareleri uyuşturun. Ayak parmağı ve / veya kuyruk sıkışma refleksi kaybı ile derin anestezinin indüksiyonunu onaylayın ve ardından fareleri servikal çıkık ile ötenazi yapın.
2. Kürkü nemlendirmek için göğse% 70 etanol uygulayın. Dış diseksiyon makası kullanarak, iç organlara zarar vermemek için makas bıçakları hayvandan uzağa açılı olacak şekilde karın boşluğunu uzunlamasına bir kesi ile açın.
3. İç doku forsepsleri ve iç diseksiyon makası kullanarak bağırsakları sıkıştırın ve karın duvarından kaldırın. Bağırsakları kaldırırken, böbrekleri içeren retroperitoneal boşluğa erişim sağlamak için bağırsakların alt tarafını proksimal duodenum ve distal kolonda vücuttan serbest bırakın.
4. Böbrekler açığa çıktıktan sonra, onları tek tek çıkarın. Üreterin distal ucunu (böbrekten ~ 4 mm uzakta) doku forsepsleri ile nazikçe sıkıştırın ve kaldırın. Diseksiyon makasını kullanarak, sıkışmış üreterin altından böbreğe doğru kesin. Çevredeki bağ dokusundan kurtulana kadar böbreğin altını kesmeye devam edin.
   not: Vibratom kesiti sırasında doku bütünlüğünü ve kesme tutarlılığını en üst düzeye çıkarmak için böbreğin mümkün olduğunca sağlam olması gerekir. Bunu sağlamak için, forseps ve diseksiyon makası ile böbreği sıkıştırmaktan veya kesmekten kaçının.
5. Üreter bağlı böbreği buz gibi soğuk bir KRB solüsyonuna yerleştirin. Farenin vücudundan çıkarmak için ekstraksiyon adımlarını kontralateral böbrek ile tekrarlayın. Böbrekleri buz üzerinde KRB solüsyonunda tutun.
   NOT: PKJ dokusunun canlılığını korumak için hemen protokolün bir sonraki bölümüne geçin. Böbrek parankiminin derinliklerindeki anatomik konumu nedeniyle, PKJ KRB çözeltisi ile temastan mahrumdur.

2. Böbrek Kapsülü Olmadan Böbreği Vibratom Kesiti İçin Hazırlayın

1. Böbreği silikon elastomer kaplı bir diseksiyon kabına (60 mm x 15 mm) aktarın ve böbrek tamamen suya batırana kadar buz gibi soğuk KRB solüsyonu ile doldurun.
2. Diseksiyon mikroskobu altında, minutien pimlerini proksimal üretere ve ince ön böbrek kapsülü veya çevresindeki yağ dokusundan geçirerek böbreği tabağın tabanına sabitleyin.
   not: Böbrek parankim dokusunu delmemeye dikkat edin.
3. Distal RP ve proksimal üreteri ortaya çıkarmak için böbreğin tabanından yağ dokusunu çıkarmak için ince yaylı makas ve iç forseps kullanın.
4. İnce yaylı makas kullanarak proksimal üreteri ve distal RP'nin bir kısmını RP tabanından çıkarın.
   not: Çevredeki böbrek parankimini kesmemeye dikkat edin. Şekil 1A'daki siyah kesikli çizgi, bu kesimin yaklaşık konumunu gösterir. Bu kesi, daha düzgün doku kesiti için böbrek üzerinde düz bir taban oluşturur. Böbreği diseke ederken, PKJ bölgesinin anatomik pozisyonunun farkında olunmalıdır. Şekil 1B, sağlam böbreğin medulla, papilla (toplama kanallarının birleştiği distal medulla) ve proksimal ve distal RP'yi ortaya çıkarmak için sagital bir düzlem boyunca kesilebileceğini göstermektedir. Papilla Şekil 1C'deki gibi tamamen açığa çıkarsa, PKJ ve proksimal RP (prox RP) görüntülenebilir. Ancak vibratom tekniği için bu yapılmamalıdır; bu açıklama, Şekil 1D, E'de PKJ bölgesi ve orta RP bölgesinin iletilen ışık görüntülerinde gösterilen anatomik farklılıkta vurgulanan, okuyucuyu genel olarak PKJ konumuna yönlendirmek içindir.
5. Dış böbrek kapsülünü ince uçlu forsepslerle delin ve uçları böbrek gövdesinden uzağa doğru açılandırın. Her iki elinizle forseps kullanarak, kapsülün gevşek uçlarını sıkıştırın ve soyun. Kalan böbrek kapsülü zarını tamamen çıkarılana kadar soymaya devam edin.
   not: Böbrek kapsülü, böbreği çevreleyen sert, lifli bir tabakadır. Optimum kesim için vibratom kesit alma işleminden önce çıkarılmalıdır.

Sonuçlar

Şekil 1: Temel böbrek anatomisi ve PKJ kalp pili bölgesinin yeri.(A) RP ve üreterin oryantasyonunu gösteren sağlam böbreğin diyagramı. Renal arter ve renal ven sırasıyla kırmızı ve mavi renkte gösterilir. (B) Sağlam böbrek, medulla, papilla (toplama kanallarının birleştiği distal medulla) ve proksimal ve distal RP dahil olmak üzere böbreğin iç yönünü ortaya çıkarmak i...

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
60 mm x 15 mm Petri kabı	Sigma Aldrich	P5481 Serisi	Böbrek keskin diseksiyon tabağı
Emici kağıt	Balıkçı Bilimsel	06-666A	Uygulamadan önce böbreği kurutmak için tutkal
B6; 129S-GT(ROSA)26Sor / J	Jackson Laboratuvarı	13148	GCaMP3 Fareler
B6; 129S-GT(ROSA)26Sor / J	Jackson Laboratuvarı	24105	GCaMP6f Fareler
B6. FVB-Tg(Myh11-cre/ERT2)1Soff/J	Jackson Laboratuvarı	19079	smMHC-CRE Fareler
C57BL / 6-Tg (Pdgfra-cre) 1Clc / J	Jackson Laboratuvarı	13148	PDGFRa-CRE Fareler
etanol	Phamco-Aaper	SDA 2B-6	Diseksiyon için
Ekstra İnce Bonn Makası	Güzel Bilim Araçları	14083-08	İç diseksiyon makası için kullanılır
İnce makas	Güzel Bilim Araçları	14060-09	Dış diseksiyon makası için kullanılır
İnce uçlu forseps	Güzel Bilim Araçları	11254-20	Böbreğin ince diseksiyonu için kullanılır
İzofluran	Baxter	NDC 1001936060	Anestezi için
Silikon elastomer	Balıkçı Bilimsel	NC9285739	Sylgard 184
Öğrenci Adson Forseps	Güzel Bilim Araçları	91106-12	Nazikçe tutmak ve hareket ettirmek için böbrek
Öğrenci Dumont Forseps	Güzel Bilim Araçları	91150-20	İç diseksiyon forsepsleri için kullanılır
Vannas yaylı makas	Güzel Bilim Araçları	15000-03	Keskin diseksiyon ve temizlik için İzole böbrek

· Adet arası