Hasta Kaynaklı Tümör Ksenogreftleme: Ürotelyal Hücreli Karsinomun Değerlendirilmesi için Deneysel Fare Modeli Oluşturma Tekniği

Bu makalede

Özet

Kaynak: Moret, R. et al. İnsan Ürotelyal Hücreli Karsinomu ve Kolorektal Kanser, Tümör Büyümesi ve Spontan Metastaz için Hasta Kaynaklı Ortotopik Ksenogreft Modelleri. J. Vis. Uzm. (2019)

Bu video, ürotelyal hücreli karsinom ilerlemesini incelemek için kullanılabilecek deneysel bir ksenogreft murin modeli oluşturma prosedürünü açıklar.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. UCC Fare Modeli

Prosedür için farelerin hazırlanması
1. 6 ila 8 haftalık dişi NOD / SCID fare edinin. Tüy dökücü krem kullanarak farenin alt kısımlarını tıraş edin. Fareyi izofluran içeren bir indüksiyon odasında uyuşturun (% 100 oksijende% 2,5, 1 L / dak).
2. Sakinleştirildikten sonra, fareyi sırtüstü pozisyonda, burnu bir izofluran burun konisine yerleştirin ve eyersiz bir dağıtıcı elektrot üzerinde sıkıca topraklayın.
  NOT: Fare, ayak parmağını sıkıştırmaya yanıt vermiyorsa tamamen sakinleştirilir.
Hasat edilen UCC tümör hücrelerini alın ve 50 μL RPMI ortamında yeniden süspanse edin. Bir anjiyokateter kullanarak UCC hücrelerini mesaneye aşılayın (Şekil 1Aa, Ab).
1. Monopolar bir elektrokoter makinesi kurun ve 4 W gücüne ayarlayın. 24 G'lik steril bir anjiyokateteri kayganlaştırıcı jöle ile yağlayın ve dişi farenin üretrasından geçirin.
  NOT: Hafif bir direnç hissedilebilir. Anjiyokateteri yavaşça ileri doğru itin veya çıkarın ve tekrarlayın. Zorlamayın. Kateter girişte bükülürse, stabiliteyi sağlamak için kateterin yarısına kadar steril bir kılavuz tel yerleştirin.
2. 0.025" sabit çekirdekli düz kılavuz telini anjiyokateterin ucundan 1 mm geçecek şekilde tamamen yerleştirin.
  NOT: Tel, 1 mm durma noktasını belirtmek ve tutarlılığı sağlamak için prosedürden önce bantla işaretlenir.
3. Monopolar pimi 1 saniye boyunca kılavuz tele tutun, bu da mesane mukozasının elektriksel tahrişine izin verir.
4. 1 cc Luer-Lok şırıngaya taze bir steril anjiyokateter takın ve toplanan hücrelerden 200 μL çekin.
  NOT: Anjiyokateterden şırıngaya en az 100 μL kaybedilir. İhtiyaç duyulan hücre süspansiyonu hacmini hesaplarken kayıp hacmini telafi edin.
5. Fare üretrasından kılavuz teli ve anjiyokateteri çıkarın. Üretraya bağlı hücre şırıngası ile anjiyokateter yerleştirin.
  NOT: İlerleme eskisinden daha kolay olmalıdır.
6. Fare mesanesine 50 μL hücre damlatın. Hücrelerin mesane duvarına yapışmasını sağlamak için anjiyokateteri çıkarmadan önce birkaç saniye bekleyin.
  NOT: Hücreler mesanede kalır ve birincil bir tümöre dönüşür.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

figure-results-1
Resim 1: Ortotopik UCC fare modelleri. (AA) Dişi bir NOD/SCID farenin mesanesine bir anjiyokateter yerleştirildi ve bir kılavuz tel aracılığıyla mesane duvarına bir elektrokoter şoku uygulandı. (Ab) Lusiferaz etiketli UCC tümör hücreleri, BlCaPt15 (2 x 10⁴ hücreli) veya BlCaPt37 (5 x 10^{5 hücreli}), 3 x 10⁵LN stromal HK hücrelerinin ekl...