Hücresizleştirilmiş Sıçan Böbreğinin Hazırlanması: Hasat Edilmiş Bir Sıçan Böbreğinden Aselüler Vaskülarize Tüm Organ İskelesi Oluşturma Prosedürü

Özet

Kaynak: Kim, E. H. et al. Sıçanlarda Decellularized Böbrek İskelelerinin Hazırlanması. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu videoda, hücresi kaldırılmış bir sıçan böbreğinin hazırlanışı anlatılmaktadır. Elde edilen aselüler vasküler iskele, organ greftlerinin doku mühendisliği için umut verici bir platform görevi görebilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Böbrek Toplama ve Hücresizleştirme

1. Sol böbreği abdominal aort ve inferior vena kava ile birlikte alın.
2. Üreter, torasik aort, superior vena kava ve abdominal aortun dallarını bağlayın.
3. Organı Dulbecco'nun PBS'sinde (DPBS) 10 cm'lik bir Petri kabında nemli tutun.
4. Abdominal aort ve inferior vena kava'yı 23G kateter ile kanül edin. Kalan kanı çıkarmak için kanülü peristaltik bir pompa ile bağlayın ve DPBS (500 mL) ve 16 U/mL heparin ile 90 dakika boyunca 37 °C'de 5 rpm hızında yıkayın.
5. Böbreği hücrelerden arındırmak için, böbreği 3 saat boyunca% 1 Triton X-100 (1 L) ve daha sonra% 0.75 sodyum dodesil sülfat (SDS) çözeltisi (2 L) ile 6 saat boyunca 40 mmHg.
   not: Böbrek 8 saat sonra şeffaf hale gelecektir.
6. Artık SDS'yi çıkarmak için, numuneyi %1 penisilin ile damıtılmış suda (6 L) 18 saat (gece boyunca) ve ardından steril DPBS (500 mL) ve 16 U/mL heparin ile 90 dakika boyunca perfüze edin.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Polietilen 50 boru, kateter boru 100 ft	Braintree Bilimsel	.023 inç × .038 inç
Sıçanlarda 3-0 ipek makara vasküler erişim / ligasyon	Braintree Bilimsel	SÜT-S 110
Fasya / bağ dokusunu kesmek için ince makas	Güzel Bilim Araçları	14058-09
25 gauge inç kılavuz iğnesi (vasküler kateterler için)	Becton Dickinson'ın fotoğrafı.	305145
Schwartz mikroserrefine vasküler klempler	Güzel Bilim Araçları	18052-01 (Düz)
5-0 Farede ipek makara vasküler erişim / ligasyon	Braintree Bilimsel	SÜT-S 106