Yöntem makalesi
2.9K görüntüleme
⸱
30 Nisan 2023
Kaynak: Burt, M. et al. Kimyasal Olarak Tanımlanmış Koşullar Altında İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücrelerden Olgun Böbrek Podositlerinin Rehberli Farklılaşması. J. Vis. Uzm. (2020)
Bu videoda, tanımlanmış kimyasal koşullar altında hücre farklılaşması yoluyla indüklenmiş pluripotent kök hücrelerden insan böbrek podositlerini türetme protokolünü açıklıyoruz. Üretilen podositler, nefrotoksisite testi ve hastalık modellemesi için kullanılabilir.
1. Reaktiflerin Hazırlanması
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Hücre | |||
| DU11 insan iPS hücreleri | DU11 (Duke Üniversitesi klonu # 11) iPS hücre hattı, Duke Üniversitesi iPSC Çekirdek Tesisinde üretildi ve bize Duke Üniversitesi'ndeki Bursac Laboratuvarı tarafından sağlandı. Bu çizgi mikoplazma için test edildi ve en son Temmuz 2019'da laboratuvarımız tarafından karyotiplendi ve karyotipik olarak normal olduğu bulundu. | ||
| Büyüme Faktörleri ve Medya Takviyeleri | |||
| All-trans retinoik asit (500 mg) | 72262 | Kök Hücre Teknolojileri | |
| B27 serumsuz takviye edici gıda | 17504044 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| CHIR99021 | 04-0004 | Kök | Partiden partiye değişiklik gösterebilir |
| Komple Orta Boy Kit Kültür Artışı-R | 4Z0-500-R | Hücre Sistemleri | Podosit bakım ortamı |
| DMEM/F12 | 12634028 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| GlutaMAX takviyesi ile DMEM/F12 | 10565042 | Termo/Yaşam Teknolojileri | Glutamin takviyesi ile DMEM / F12 |
| Isı ile etkisiz hale getirilmiş FBS | 10082147 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| İnsan aktivin A | PHC9564 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| İnsan BMP7 | PHC9544 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| İnsan VEGF | PHC9394 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| mTeSR1 ortamı | 05850 | Kök Hücre Teknolojileri | hiPS hücre kültürü ortamı (CCM) |
| Penisilin-streptomisin, sıvı (100×) | 15140-163 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| Y27632 KAYA inhibitörü | 1254 | Tocris (Türkçe) | |
| Antikor | |||
| Alexa Fluor 488- ve Alexa Fluor 594-konjuge ikincil antikorlar | A32744; A32754; A-11076; A32790 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| Brachyury(T) | AB20680 | Abcam Belediyesi | |
| Nefrin | GP-N2 | Progen (Gen Çiçeği | |
| 4 OCT4 | AF1759 | Ar-Ge Sistemleri | |
| KİŞİ 2 | 71-6000 | Canlandırıcı | |
| WT1 (İngilizce | MAB4234 | Kırlangıç | |
| ECM Molekülleri | |||
| iMatrix-511 Laminin-E8 (LM-E8) parçası | N-892012 | Iwai Kuzey Amerika | Bodrum membranı (BM) matrisi 2 |
| Matrigel hESC nitelikli matris, 5 mL şişe | 354277 | BD Biyolojik Bilimler | Bodrum membranı (BM) matrisi 1. Partiden partiye değişiklik gösterebilir |
| Enzimler ve Diğer Reaktifler | |||
| Aktataz | A1110501 | Termo/Yaşam Teknolojileri | Hücre ayırma çözümü |
| Bsa | A9418 | Sigma-Aldrich | |
| Dimetil Sülfoksit (DMSO) | D2438 | Sigma-Aldrich | DMSO toksiktir. Kimyasal güvenlik başlığı içinde ele alınmalıdır |
| Enzim içermeyen hücre ayrışma tamponu, Hank'in dengeli tuzu | 13150016 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| Etanol çözeltisi, %70 (hacim/hacim), biyoteknoloji sınıfı | 97065-058 | VWR (VWR) | Etanol yanıcı ve zehirlidir |
| FBS (FBS) | 431097 | Corning | |
| Paraformaldehit (PFA) | 28906 | Termo/Yaşam Teknolojileri | PFA, eldivenler, laboratuvar önlüğü ve koruyucu gözlükler dahil olmak üzere uygun kişisel koruma ekipmanlarına sahip bir kimyasal çeker ocakta kullanılmalıdır. Solumaktan ve cilt ile temasından kaçının. |
| Fosfat tamponlu salin (PBS) | 14190-250 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| Steril Damıtılmış Su | 15230162 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| Triton X-100 | 97062-208 | VWR (VWR) | |
| Tripsin-EDTA, %0.05 | 25300-120 | Termo/Yaşam Teknolojileri | |
| ekipman | |||
| Aspirasyon pipetleri, ayrı ayrı sarılmış | 29442-462 | Corning | |
| Avanti J-15R Santrifüj | B99516 | Beckman Coulter'ın fotoğrafı. | |
| Konik santrifüj tüpü, 15 mL | 352097 | Corning | |
| Konik santrifüj tüpü, 50 mL | 352098 | Corning | |
| Kriyo kutuları | 3395465 | Termo/Yaşam Teknolojileri | Dondurulmuş alikotları saklamak için |
| EVOS M7000 | AMF7000 | Termo/Yaşam Teknolojileri | Sabit ve lekeli iPS hücrelerinin ve türevlerinin görüntülerini elde etmek için kullanılan floresan mikroskop |
| Hemositometre | 100503-092 | VWR (VWR) | |
| Heracell VIOS 160i CO2 inkübatörü | 51030403 | Termo/Yaşam Teknolojileri | iPS hücrelerinin ve türevlerinin rutin kültürü ve bakımı için |
| AxioCam 503 kamera ile donatılmış ters Zeiss Axio Observer | 491916-0001-000(mikroskop) ; 426558-0000-000(Kamera) | Carl Zeiss Mikroskobu | Podosit farklılaşmasının her aşamasında canlı iPS hücrelerinin ve türevlerinin faz kontrast görüntülerini elde etmek için kullanılır |
| Kimberly-Clark nitril eldivenler | 40101-346 | VWR (VWR) | |
| Kimwipes, büyük | 21905-049 | VWR (VWR) | |
| Kimwipes, küçük | 21905-026 | VWR (VWR) | |
| P10 hassas bariyerli pipet uçları | P1096-FR | Denville Bilimsel | |
| P100 bariyerli pipet uçları | P1125 Serisi | Denville Bilimsel | |
| P1000 bariyerli pipet uçları | P1126 Serisi | Denville Bilimsel | |
| P20 bariyerli pipet uçları | P1121 Serisi | Denville Bilimsel | |
| P200 bariyerli pipet uçları | P1122 Serisi | Denville Bilimsel | |
| Serolojik pipet, 10 mL, ayrı ayrı sarılmış | 356551 | Corning | |
| Serolojik pipet, 25 mL, ayrı ayrı sarılmış | 356525 | Corning | |
| Serolojik pipet, 5 mL, ayrı ayrı sarılmış | 356543 | Corning | |
| Steriflip, 0.22 μm, PES | SCGP00525 | EMD Kırlangıç | |
| Steril Mikrosantrifüj Tüpleri | 1138W14 | Thomas Bilimsel | Büyüme faktörlerini ayırmak için |
| Doku kültürü ile tedavi edilmiş 12 oyuklu plakalar | 353043 | Corning | |
| Doku kültürü ile tedavi edilmiş 6 oyuklu plakalar | 353046 | Corning | |
| VWR beyaz techuni laboratuvar önlüğü | 10141-342 | VWR (VWR) | |
| Geniş eğimli hücre kaldırıcı | 3008 | Corning |
Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste
İzin iste