Kanser Sferoid Bloklarının Flaş Dondurma ile Hazırlanması: Donmuş Matriks Bloklarında Kanser Sferoidlerini Korumak İçin Bir Prosedür

Özet

Kaynak: Wang, Y. et al. 3-D Mesane Kanserinde İnvazyonu İncelemek ve Terapötikleri Değerlendirmek için Hücre Kültürü Sistemi. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu video, ilgilenilen bir doku örneğinin ultra soğuk bir sıcaklığa dondurulduğu ve matris içindeki sferoidleri kısıtladığı bir teknik olan flaş dondurma ile kanser sferoid bloklarının hazırlanmasını göstermektedir.

Protokol

1. Donmuş Doku Kesiti İçin Kanser Sferoidleri İçeren Örnek Bloğunun Hazırlanması

1. Küçük forsepsler kullanarak kollajen jel ve sferoid bloğunu oda slaytlarından dikkatlice kaldırın. Kollajen jel bloğunu plastik bir histoloji kalıbına yerleştirin.
2. Kollajen jeli 1x PBS ile kısa bir süre durulayın ve ardından oda sıcaklığında 30 dakika boyunca PBS'de% 4 paraformaldehit (PFA) ile sabitleyin.
   not: PFA potansiyel bir kanserojendir ve dikkatli bir şekilde ele alınmalıdır.
3. Kollajen jeli 1.5 mL 1x PBS ile bir çalkalayıcı üzerinde 15 dakika yıkayın. PBS'yi değiştirin ve önceki yıkama adımını 3x tekrarlayın.
4. Yeni bir plastik histoloji kalıbının altını kaplamak için ince bir tabaka (yaklaşık 3 mm) optimum kesme sıcaklığı (OCT) bileşiği uygulayın. Sabitlenmiş ve yıkanmış kollajen jeli OCT bileşiğinin üzerine yerleştirin, ardından OCT'de herhangi bir hava kabarcığı oluşumunu önlerken kalıbı OCT bileşiği ile doldurarak tüm jeli dikkatlice gömün.
5. Kalıbı 4 °C'de 1 saat bekletin.
6. Numuneyi ve OCT bileşiğini içeren kalıbı, sıvı nitrojen üzerinde yüzen 100 mm'lik bir Petri kabına yerleştirin. Numunenin tamamen donmasına izin verin.
7. Dondurulmuş numune bloğunu ileride kullanmak üzere -80 °C'de saklayın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
DMEM hücre kültürü ortamı	Thermo Fisher Bilimsel	11995065
Fetal sığır serumu	Thermo Fisher Bilimsel	26140079
Antibiyotik-Antimikotik (100x)	Thermo Fisher Bilimsel	15240062
Sığır serum albümini (BSA)	Sigma-Aldrich	A3803
Fosfat tamponlu tuzlu su (PBS), pH 7.4	Thermo Fisher Bilimsel	10010023
Sıçan kuyruğundan kollajen tip 1, yüksek konsantrasyon	Corning	354249
Nunc Lab-Tek II Odacıklı Kapak camı	Thermo Fisher Bilimsel	155382
Paraformaldehit çözeltisi	Elektron Mikroskobu Bilimleri	15710
O.C.T bileşiği	Thermo Fisher Bilimsel	23730571

Gazetesi Serisi