Yöntem makalesi

Elektroporasyon Kullanarak Eksozomlara siRNA Kapsüllemesi: siRNA'yı Eksozomlara Yüklemek için Elektrik Darbesine Dayalı Bir Teknik

30 Nisan 2023

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kaynak: Faruqu, F. N. et al. Kanser Hücrelerine siRNA İletimi için Eksozomların Hazırlanması. J. Vis. Uzm. (2018)

Bu videoda, siRNA'yı eksozomlara kapsüllemek için elektroporasyon tabanlı bir yöntem açıklanmaktadır. siRNA yüklü eksozomlar daha sonra terapötik uygulamalar için kullanılabilir.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

>1. Elektroporasyon ile Eksozomlara siRNA Kapsüllemesi

  1. Elektroporasyon küvetini (Malzeme Tablosuna bakın) elektroporasyondan önce 30 dakika buz üzerinde önceden soğutun.
  2. Mikrosantrifüj tüpünde 7.0 μg eksozomu (PBS'de 7 x 1012 p/mL stoktan 32 μL) 0.33 μg siRNA (RNaz içermeyen suda 2 μM stoktan 12 μL) ile karıştırın. Sitrik asit tamponu ile hacmi 150 μL'ye kadar tamamlayın (Malzeme Tablosuna bakınız). Bu durumda eksozom / siRNA molar oranı 1:60'tır.
  3. Karışımı elektroporasyon küvetine aktarın. Küveti kapatın ve elektroporatörün küvet tutucusuna yerleştirin (Malzeme Tablosuna bakın). Dönen tekerleği saat yönünde 180° döndürün.
    not: Küvetin elektrotlarla temas edebilmesi için tekerleğin tamamen kilitli konuma getirilmesi gerekir.
  4. İstenen elektroporasyon programını seçin (örn. X-01, X-05, A-20, T-20, T-30, vb.) ve başlat düğmesine basarak elektroporasyonu başlatın.
    not: Başarılı bir darbe, ekranda "OK" gösterilerek gösterilir.
  5. Elektrikli olarak yerleştirildikten sonra, tekerleği saat yönünün tersine 180° geri çevirdikten sonra küveti çıkarın. Daha sonraki işlemler için numuneyi plastik pipetle küvetten çekin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Herhangi bir çıkar çatışması beyan edilmedi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Atto655-siRNAEurogentec TeknolojisiMEYDAN-SIRNA(Etiketli-S) UGC-GCU-ACGAUC-GAC-GAU-G55; (EtiketsizAS) CAU-CGU-CGA-UCG-UAGCGC-A55.
Cam pipetlerBalıkçı Bilimsel1156-6963
Amaksa Nükleofektör IFransaNükleofektör IAmaxa'nın Nükleofektör kitleri ile
EDTA'lı sitrik asit tamponu0.1954 g sitrik asit ve 0.2087 g disodyum fosfatı 50 mL deiyonize suda karıştırın. EDTA'yı 0,1 mM'ye ekleyin. PH'ı 4.4'e ayarlayın.
Mikrofuj tüpleriYıldız LaboratuvarıS1615-55001,5 ml
Serisi

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Ekzozom Y klemeElektroporasyon Tekni isiRNA letimiEkzozom MembranElektrik PulslarTerap tik UygulamalarGen SusturmaEkzozom zolasyonusiRNA Ekzozomlar

İlgili makaleler