Luciferase etiketli Glioma Kök Hücre Modeli: Luciferase etiketli Glioma Kök Hücrelerini In Vitro Terapötik Çalışmalar için Hazırlamak için Lentivirus aracılı bir yöntem

Özet

Kaynak: Hu, Z. et al. Hastadan Elde Edilen Glioma Kök Hücrelerini Kullanarak GBM için Potansiyel Kombinasyon Tedavisini Belirlemek için Hızlı Bir Tarama İş Akışı. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu video, lentivirüs aracılı gen iletimi yoluyla lusiferaz etiketli glioma kök hücrelerinin oluşumunu göstermektedir. Lusiferaz bir muhabir gen görevi görür ve hızlı ilaç tarama deneylerini kolaylaştırmaya yardımcı olur.

Protokol

1. Luciferase etiketli GSC'lerin hazırlanması

1. GSC kültürü ile başlayın ve oda sıcaklığında 3 dakika boyunca 70 x g'da santrifüjleyin.
2. Süpernatanı çıkarın ve hücreleri 37 ° C'de 4 dakika boyunca akütataz ile sindirin. Hücre peletini ayırmak ve yeniden süspanse etmek için 200 μL'lik bir uç ve tekrar tekrar pipetleyin.
3. Hücreleri 12 oyuklu bir kültür plakasında oyuk başına 2 x 10⁵ hücreye seyreltin ve hücreleri gece boyunca kültürleyin.
4. Plakadaki her bir oyuğa 30 μL lusiferaz-EGFP virüsü süpernatantı (titre >10⁸ TU / mL) ekleyin ve ardından hücreleri 25 ° C'de 2 saat boyunca 1.000 x g'da santrifüjleyin. Hücreleri gece boyunca kültürleyin.
5. Ertesi gün ortamı yenileyin ve hücreleri 48 saat daha kültürleyin.
6. GFP pozitif hücrelerin görünümünü doğrulamak için hücreleri floresan mikroskobu altında gözlemleyin.
7. Hücreleri daha fazla kültürlemek için yüksek GFP floresansına sahip GSC'leri sıralamak ve seçmek için bir akış hücresi sıralayıcı kullanın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
B-27 Uzay Aracı	Gibco (Gibco)	17504-044	50 katı
EGF (Türkçe)	Gibco (Gibco)	PHG0313	20 ng/ml
Kadın Sünneti	Gibco (Gibco)	PHG0263	20 ng/ml
Gluta Maks	Gibco (Gibco)	35050061	100 kat
Nörobazal	Gibco (Gibco)	21103049	1 katı
Penisilin-Streptomisin	HyClone (Klon	SV30010	P: 10.000 birim / ml S: 10.000 ug / ml
Sodyum Pirüvat	Gibco (Gibco)	2088876	100 milyon

)