Fare Modelinde Kranial Görüntüleme Penceresinin İmplantasyonu: Murin Beyninin Bölgelerine Stabil Optik Erişim için Cam Tabanlı Lamel İmplante Etmek İçin Cerrahi Bir Prosedür

Özet

Kaynak: Alieva, M. et al. İnvaziv Cerrahi Biyopsiye Yanıt Olarak Beyin Tümörü Hücresi Davranışının Boylamsal İntravital Görüntülemesi.J. Vis. Uzm.(2019)

Bu video, beynin farklı bölgelerine stabil optik erişim için bir fare modeline kraniyal pencere implante etmek için cerrahi bir prosedür sunmaktadır.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Tümör Hücre İmplantasyonu ve Kranial Görüntüleme Penceresi Hazırlığı

1. Cerrahi Hazırlık
   1. Herhangi bir suş veya cinsiyetten yetişkin fareler (>6 haftalık) kullanın. Steril suda 1: 1: 2 dozunda fluanison [nöroleptik] + fentanil [opioid]) (0.4 mL / kg) + benzodiazepin yatıştırıcı (2 mg / kg) enjekte ederek bir fareyi sakinleştirin. Hayvanın sedasyon durumunu ayak parmağınızı çimdikleyerek değerlendirin.
      not: Bu protokolde, bu deneylerde kullanılan tümör hücre hattının aynı genetik arka planı nedeniyle hem dişi hem de erkek C57BL / 6 fareleri kullanıldı (GL261). Fare 1,5 saat boyunca tamamen yatıştırılmış olarak kalacaktır. Alternatif olarak, izofluran (% 1.5 -% 2 izofluran /_O2 karışımı) gibi inhalasyon anestezisi kullanın.
   2. Fareyi stereotaktik bir çerçeveye monte edin ve bir burun kelepçesi ve iki kulak çubuğu kullanarak kafayı sabitleyin.
   3. Vücut ısısını korumak için bir ısıtma lambası kullanın. Isıtma lambası dikkatli kullanılmalıdır, alternatif olarak su sirkülasyonlu ısıtma pedleri kullanılabilir.
   4. Farenin kornealarının kurumasını önlemek için göz merhemi sürün.
   5. Kafatasındaki kürkü (farenin gözlerinden kafatasının tabanına kadar olan sırt bölgesi) tıraş etmek için keskin bir makas kullanın ve açıkta kalan cildi% 70 etanol ile dezenfekte edin.
   6. Cildi keskin bir makasla dairesel bir şekilde kesin ve altındaki periosteuumu pamuklu çubukla kazıyın. 5 dakika boyunca bir damla lidokain% 1 + epinefrin 1: 100.000 uygulayın ve fazlalığı pamuklu çubukla alın.
   7. Derinin kenarlarını siyanoakrilat yapıştırıcı ile kafatasına yapıştırın.
   8. Stereotaktik çerçeveyi 4x büyütmeli bir diseksiyon stereo mikroskobunun altına yerleştirin.
   9. Kafatasını diseksiyon mikroskobu ile görselleştirin ve sağ parietal kemik üzerinde 5 mm çapında dairesel bir oluk açın. Bu adımı dikkatli ve sadece yüzeysel olarak gerçekleştirin, kafatasına herhangi bir baskı uygulamaktan kaçının.
   10. Bir damla korteks tamponu uygulayın (125 mM NaCl, 5 mM KCl, 10 mM glikoz, 10 mM HEPES tamponu, 2 mM MgSO4 ve 2 mM CaCl₂ [pH 7.4]) ve ince forseps kullanarak kemik flebini kaldırın.
   11. Aşağıdaki adımlar için, aksi belirtilmedikçe beyin yüzeyini korteks tamponu ile kapalı tutun.
   12. Diseksiyon mikroskobu altında, beyin yüzeyini görselleştirin ve kavisli, konik, çok ince uçlu cımbız kullanarak dura materini çıkarın. Bu aşamada kanama meydana gelirse, durdurmak için emilebilir bir jelatin sünger kullanın.

2. Kranial Görüntüleme Penceresi Hazırlığı

1. Korteks tamponunu çıkarın ve pencerenin altındaki hava kabarcıklarını önlemek için kraniyotomi bölgesine bir damla silikon yağı koyun.
2. Açıkta kalan beyni 6 mm'lik bir lamel ile kapatın. Lamel ile kafatası arasına siyanoakrilat yapıştırıcı sürün. Beyin ile lamel arasında minimum mesafeyi sağlamak için lameli ince cımbız yardımıyla kafatasına hafifçe bastırın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
25G x 16 mm hipodermik iğneler	BD Mikromızrak
Emilebilir jelatin sünger	Pfizer	300600
Lameller yuvarlak 6 mm	VWR uluslararası		Jel köpük
Siyanoakrilat yapıştırıcı	Patteks Çiçeği	631-0168	Pattex Ultra jel
Diş çimentosu	Vertex Diş		Vertex Kendi Kendine Kürlenen
alıştırma	Dremel Gölü		Dremel 3000 (diş matkabı daha kullanışlı olabilir) + 105 Gravür Kesici
İnce kavisli Cımbız	Dumont
Silikon Yağı	Sigma Aldrich	AGT508
Stereotaksik çerçeve	Çalmak	181838
Cerrahi stereo mikroskop	Olympus		Laboratuvar standardı stereotaksik, sıçan ve fare
Oftalmik merhem	Kela Veterinaria		Duodrops veter kela 10 m
Ksilokain (Lidokain %1 + Epinefrin 1:100.000) Lokal anestezik	Astrazeneca Uçak		Ksilokain (Lidokain %1 + Epinefrin 1:100.000)
Hipnorm	Veta İlaç Ltd. Şti.		Hipnorm (Fentanil sitrat 0.315 mg/mL + Fluanison 10 mg/mL)
Midazolam	Actavis Haber Ajansı		Midazolam Actavis 5 mg / mL

· Serisi Bileti