Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Floresan Kılavuzluğunda Rezeksiyon ve İskele İmplantasyonu
>NOT: Ameliyatı başlatmadan önce tüm aletleri sterilize edin.
- Stereotaksik çerçeveyi bir floresan diseksiyon stereomikroskobunun sahnesine yerleştirin.
- Fareyi bir indüksiyon odasında solunan izofluran altında uyuşturun. Anestezi uygulandıktan sonra, fareyi bir izofluran burun konisi adaptörü aracılığıyla sürekli inhale anestezi beslemesi ile stereotaksik çerçeveye sabitleyin. Vücut ısısını bir ısıtma yastığı ve/veya prob ile koruyun.
NOT: %4-5 izofluran indüksiyon için ve %2-3 bakım için uygundur, ancak bu her fare için uyarlanmalı ve izlenmelidir.
- Korneanın kurumasını önlemek için gözlere oftalmik merhem sürün. Kafa derisinin kesi bölgesini bir dizi üç alkol ve üç betadin mendil ile sterilize edin.
- Her uzuvda ayak parmağı kıstırma refleks testi yapın ve uygun anesteziyi sağlamak için negatif yanıtı onaylayın. Yaklaşık 55-65 nefes/dk'da sabit bir solunum hızı sağlayın.
- Forseps kullanarak kafa derisini sıkıştırın ve nazikçe kaldırın. Cerrahi makasla orta hat lineer rostral-kaudal insizyon yapın. Kesi bölgesini PBS ile sulayın ve dairesel bir fırçalama hareketiyle pamuk uçlu bir aplikatör ile deri altı yağını alın. Cildi, önceden kurulmuş olan kraniyal pencere tamamen görünür olacak şekilde düzenleyin.
- 18G'lik bir iğne kullanarak dura'yı kafatası penceresinin sınırlarına kadar nazikçe delin. Kesi pencerenin içini tamamen izleyene kadar tekrarlayın.
- Durayı, altta yatan parankimi ve tümörü ortaya çıkaran ince forseps kullanarak soyarak çıkarın.
- Oda ışıklarını kapatarak ve stereomikroskop floresan modunu açarak U87 mCh-Fl tümörünü bulun. Bir vakum pompasının hortumunun ucuna 1–200 μL'lik bir pipet ucu yükleyerek rezeksiyona hazırlanın.
- Vakum pompasını açın. Hiçbir sinyal kalmayana kadar floresan dokuyu hafifçe aspire ederek tümörü rezeke edin. Vakum pompasını kapatın ve pipet ucunu atın. Floresanı kapatın ve oda ışıkları tekrar açılsın.
NOT: Kanamayı kontrol etmek için soğuk PBS ile yıkayın ve pamuk uçlu bir aplikatör ile sabit basınç uygulayın. Daha ciddi vakalarda, rezeksiyon boşluğu, kanama durduktan ve ardından başka bir PBS irrigasyonu yapıldıktan sonra çıkarıldığı sürece geçici olarak hemostatik bir ajanla da paketlenebilir.
- İmplantasyondan hemen önce, istenmeyen ortamları ve ilgili bileşenleri çıkarmak için MSC tohumlu bir PLA iskelesini PBS'ye yavaşça daldırın. İskeleyi rezeksiyon boşluğuna implante edin. Gerekirse, iskeleyi yerine sabitlemek için 1 μL fibrinojen (67-106 mg / mL) ve ardından 1 μL trombin (400-625 U / mL) ekleyin.
- Dura çıkarılmış ve kraniyal pencereden kemik flebi atılmış durumdayken, cildi kapatarak ve cerrahi yapıştırıcı uygulayarak yarayı kapatın. Hayvanı solunan anestezikten çıkarın ve ısıtılmış bir yüzeyde iyileşmesine izin verin.
