Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1.FMT Görüntüleme
>NOT: Deneysel amaca göre, iRFP etiketli glioblastoma hücreleri tedavi öncesinde, sırasında veya sonrasında in vivo olarak izlenebilir. Görüntüleme amacıyla, bir izofluran indüksiyon odası kullanarak hayvanları uyuşturun, tarama sırasında bir görüntüleme kasetinde saklayın ve görüntüyü FMT görüntüleyicinin yerleştirme istasyonunda tutun.
- Hayvanı kafesten çıkarın ve izofluran indüksiyon odasına yerleştirin. Hazneyi kapatın ve oksijen akışını ve buharlaştırıcıyı% 3-5'e getirin.
- Hayvanı tamamen anestezi uygulanana kadar, genellikle 1-2 dakika içinde izleyin. Bilinçsiz hayvanlar dış uyaranlara cevap vermemelidir.
- Anestezi uygulanmış hayvanı hazneden çıkarın ve önce kafa adaptörünü yerleştirerek hayvanı görüntüleme kasetine koyun, ardından hayvanı aşağı bakacak şekilde yerleştirin. Başlığın kasetin ortasına yerleştirildiğinden emin olun.
- Kasetin üst plakasını üstüne yerleştirin ve ayar düğmelerini 17 mm'ye kadar sıkın.
- Hayvan görüntüleme kasetine yerleştirildikten sonra, kaseti FMT görüntüleyicinin dahili yerleştirme istasyonuna yerleştirerek görüntülemeye devam edin, burada hayvanı uyuşturmak için izofluran pompalanır.
- Yazılım simgesini çift tıklatarak görüntüleyici ve çözümleyici yazılımını çalıştırın.
- "Deneysel sekme" penceresinde, "Veritabanı" ve "Çalışma grubu" nu seçin.
- "Tarama sekmesi" penceresine gidin ve "konu seç" i tıklayarak resmin konusunu seçin. Ayrıca, "Lazer kanalı" panelinde lazer kanalını seçin. FP635 etiketli hücreler için "lazer kanalı 635 nm"yi seçin ve FP720 etiketli hücreler için "lazer kanalı 680 nm"yi seçin.
- "Tarama sekmesi" penceresindeki "Yakala" seçeneğini tıklayarak bir görüntü elde edin. Ardından, yakalanan görüntüdeki tarama alanını tıklayıp belirli sayıda kaynak konumuna, genellikle ipsilateral taraf için 20-25 kaynak içinde sürükleyerek tarama alanını ayarlayın.
- "Yeniden yapılandırma kuyruğuna ekle" seçeneğini işaretleyin ve "Tarama sekmesi" penceresinde "Tara" düğmesine basın.
- Tarama tamamlanana kadar bekleyin ve ardından görüntü kasetini yerleştirme istasyonundan çıkarın.
- Kasetin üst plakasını çıkarın ve hayvanı tekrar kafese yerleştirin.
- Diğer hayvanlar için 1.1–1.12 adımlarını tekrarlayın.
2. Görüntü Analizi
- Görüntüleyici ve analizör yazılımından "Analiz sekmesi" penceresini seçin.
- "Analiz sekmesi" penceresinin "Veri kümesi seçimi" panelindeki "+" düğmesine tıklayarak analiz edilecek veri kümesini ve konuyu yükleyin.
- Görüntü "Analiz sekmesi" penceresine yüklendikten sonra, "Analiz sekmesi" penceresinin sol üst köşesinde bulunan elipsoid simgesini seçerek ilgi bölgesi (ROI) analizini gerçekleştirin.
- "Analiz sekmesi" penceresindeki "eşik" sütununu sağ tıklayarak "istatistik verileri" panelinde eşiği sıfıra ayarlayın.
- "İstatistik verileri" panelindeki toplam değer, fare beynine implante edilen floresan etiketli glioblastoma hücrelerinden gelen sinyali temsil eder.
- Diğer hayvanlar için 2.2–2.4 adımlarını tekrarlayın. "Analiz sekmesi" penceresinin "Veri kümesi seçimi" panelinde sırasıyla "+" veya "-" düğmesini tıklayarak yeni bir konu yükleyin veya kaldırın.