$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Fareleri Tümör Hücresi Enjeksiyonu için Hazırlayın
- Bir fareyi intraperitoneal (i.p.) ketamin / ksilazin kokteyli (ketamin 100 mg / kg, ksilazin 10 mg / kg) enjeksiyonu ile uyuşturun.
- Hayvanın ayaklarını sıkarak tam anesteziyi onaylayın ve yanıt eksikliğini gözlemleyin.
- Fareyi bir cam tabağa (protein jellerini dökmek için kullanılır) yerleştirin ve lastik bantlarla sabitleyin.
- Gerekirse, tıraş ederek veya az miktarda tüy dökücü ürün uygulayarak ve saçları kağıt havluyla silerek boyun kıllarını alın.
not: Çıplak fareler kullanıyorsanız, vücut kılları olmadığı için bu adımı atlayın.
- Povidon-iyot ve %70 alkol uygulayarak boyun derisini temizleyin.
- Fareyi diseksiyon mikroskobunun sahnesine yerleştirin
- Cerrahi bir neşter ile ciltte ~ 1 cm uzunluğunda bir kesi yapın.
- Altındaki karotis arteri ortaya çıkarmak için kası dişli forseps ile künt bir şekilde inceleyin.
- Karotis arteri cerrahi forseps ile bitişik vagus sinirinden ayırın.
- Cerrahi forseps kullanarak, bir miktar pamuğu bir pamuk topundan ayırın, nemlendirin ve daha küçük bir pamuk topu haline getirin. Bu tamponla nemlendirilmiş pamuk topunu, amaçlanan enjeksiyon bölgesinin karotis arterinin altına yerleştirin.
- Pamuğun distaline ve proksimaline bir dikiş yerleştirin ve gevşek düğümler yapın. Enjeksiyon bölgesine kan akışını engellemek için proksimal düğümü sıkın.
- Pamuk topunun üzerindeki karotis arter taze kırmızı kanla tamamen basınçlı görünüyorsa kanser hücresi enjeksiyonuna devam edin.
2. Karotis Artere Kanser Hücresi Enjeksiyonu
- Vorteks yapın ve 100 μL kanser hücresini şırıngaya çekin.
- Diseksiyon mikroskobu altında, 31G iğnesini (eğim yukarı bakacak şekilde) pamuğun üzerinde oturan karotis arterin lümenine yavaşça sokun.
- Hücreleri şırıngadan yavaşça karotis artere enjekte edin. Başarılı enjeksiyon, tamponlanmış kanser hücreleri dolaşıma itildiğinde yakındaki kan damarlarının ve kas sisteminin değişen rengi ile mikroskop altında gözlemlenebilir.
- Tüm hacmin enjeksiyonu tamamlandığında, yetersizliği önlemek için distal karotis arteri hafifçe kaldırın.
- Enjeksiyon işlemini tamamlamak için distal düğümü hızla sıkın.
- Enjeksiyonu tamamladıktan sonra, ligatürleri sıkın ve fazla ipek ipliği diseksiyon mikroskobu altında mikro makasla kesin. Yara bölgesini kaplamak için ayrılan kası geri hareket ettirin. Cildi iki zımba ile kapatın.
3. Cerrahi İyileşme
- Ameliyat edilen hayvanı kurtarmak için bir ısıtma yastığına taşıyın. Hayvanların bilincini geri kazanması 30-60 dakika sürebilir. Bu arada, cerrahi sonrası analjezi olarak deri altı enjeksiyon yoluyla buprenorfin (0.05 mg / kg) uygulayın.
not: Analjezi, yerel IACUC onaylı protokolünüze göre sağlanmalıdır.
- Hayvanlar uyandığında ve normal davranışlarına devam ettiklerinde, fareleri barınma yerlerine geri koyun. Ameliyattan sonraki birkaç gün boyunca farelere jel yiyecek sağlayın. Cerrahi bir kayıt tutun ve odada saklayın.
4. Non-invaziv İn Vivo Görüntüleme
- Lusiferaz raportör yapılarıyla etiketlenmiş hücreler için, in vivo görüntüleme sistemini kullanarak kanser hücresi enjeksiyon verimliliğini ölçün.
not: Araştırma hayvanlarına aşırı stres uygulamamak için enjeksiyon günü görüntüleme yapılmaz.