Erişkin Murin Modelinden Damak Dokusu Diseksiyonu: Erişkin Farenin Ağız Boşluğundan Sert Damak ve Yumuşak Damak Elde Etmek İçin Cerrahi Bir İşlem

Özet

Kaynak: Xuan Ngo, Y. et al. Yetişkin Fare Damaktan Primer Oral Keratinositlerin İzolasyonu ve Kültürü. J. Vis. Uzm.(2021)

Bu video, bir fare modelinden damak dokusunu incelemek için cerrahi bir prosedürü göstermektedir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Yetişkin Fareden Damak Dokusu Diseksiyonu

1. Tesisin hayvan refahı ile ilgili düzenlemelerine uygun olarak servikal çıkık nedeniyle yetişkin bir C57BL/6J fareyi (erkek veya dişi) kurban edin.
   1. Ağız çevresindeki tüyleri bir tıraş makinesi ile alın. Makas kullanarak yanaktan çeneye doğru her iki taraftan kesin.
      not: Farenin kurban edilmeden önce uyuşturulması gerekir. Medetomidin, midazolam ve butorphanolün anestezik bir karışımı kullanılır (bkz. Malzeme Tablosu).
2. Ağzı geniş açmak için forseps kullanın ve pamuklu çubuk kullanarak kanı emin. Damağı dezenfekte etmek için ağız içini %10 povidon-iyot içeren bir pamuklu çubukla silin.
3. Fare damağını hasat etmek için önce cerrahi bir neşter bıçağı kullanarak maksiller dişlerin damak tarafı boyunca tam kalınlıkta marjinal bir kesi yapın. Ardından, bir raspatorium kullanarak tüm damağı dikkatlice inceleyin.
   not: Bir raspatoryum, bir mukoperiosteal flebi yükseltmek için kullanılan bir araçtır (bakınız Malzeme Tablosu) (Şekil 1B).
4. Damak dokusunu hızlı bir şekilde 4 mL tam besiyeri + antibiyotik-antimikotik solüsyon içeren 15 mL'lik bir tüpe aktarın. Kuluçka için hazır olana kadar dokuları buz üzerinde tutun.
   not: Birden fazla fareden toplama için, damak dokuları 4 saate kadar buz üzerinde tutulabilir.

Sonuçlar

Şekil 1: Fare oral keratinositlerinin diseksiyon prosedürüne ve izolasyonuna genel bakış. (A) Fare ağız boşluğunun şematik gösterimi. (B) Damağı incelemek ve fare oral keratinositlerini izole etmek için kullanılan aletler. (C) Fare damağının parlak alan görüntüsü. Ölçek çubuğu: 100 μm. (D) Protokolün özeti.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
İris Makası	Muromachi Kikai	14090-09
Medetomidin	Nippon Zenyaku Kogyo		Domitor (Hakim)
Midazolam	Astellas İlaç		Dormicum (Dormicum)
No.15 Tek kullanımlık neşter	tüy	219AABZX00136000
Öksüzol	Meiji Seika İlaç		Vetorphale
Yarı kavisli forseps	BRC Biyoaraştırma Merkezi	PRI13-3376 Serisi
Povidon-iyot	Y'nin Meydanı	872612
Raspatorium #14	TEK OLARAK	8-4599-01
İnce forseps	BRC Biyoaraştırma Merkezi	PRI13-3374
Antibiyotik-Antimikotik 100x	Gibco (Gibco)	15240062
15 mL steril konik tüp	doğan	352096
pamuk	TEK OLARAK	63-1452-97
EpiLife Tanımlı Büyüme Takviyesi (EDGS)	Gibco (Gibco)	S0120 Serisi

Belediyesi Serisi