Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Anestezi ve Trakeal Kanülasyon
- Anestezik ilaçların dozajını, ameliyat sonrası analjezik ilaçları ve ventilatörün tidal hacmini belirlemek için fareyi tartın. Isıtma yastığını 37 °C'de önceden ısıtın. Cerrahi düzenek Şekil 1'de gösterilmiştir.
- Fareyi sırasıyla 80 mg / kg ve 10 mg / kg'lık bir dozda ketamin ve ksilazin karışımı ile intraperitoneal olarak enjekte edin.
- Elektrikli bir tıraş bıçağı kullanarak fare kürkünü boğazda ve göğüs kafesinin sol tarafında hızlı bir şekilde tıraş edin.
- Kuyruk ve/veya arka ayakları sıkıştırarak anestezi derinliğini kontrol edin ve hayvanı ısıtma yastığı üzerinde sırtüstü pozisyonda oturtun. Gözlerin aşırı ısınmasını önlemek için hayvanın başının altına küçük bir gazlı bez kompresi yerleştirin. Göz kuruluğunu önlemek için oküler jel uygulayın.
- Dört uzvu ısıtma yastığının yüzeyine yapışkan bantla sabitleyin. Üst kesici dişlerin altından 5-0 ipek sütürlü bir halka geçirin ve ilmeğin ucunu yapışkan bantla ısıtma yastığının üzerine yapıştırın. Bu, hayvanın ağzını açık tutacak ve kanülasyonu kolaylaştıracaktır.
- Önceden traş edilmiş bölgelere tüy dökücü krem sürün ve pamuklu çubukla 1 dakika boyunca nazikçe masaj yapın. Fazla kürk ve kremi bir gazlı bezle silin. Kesi alanlarını temizlemek için% 0.9 tuzlu su çözeltisi ve gazlı bez damlaları kullanın. Traş edilmiş boğaza ve göğüs kafesine steril gazlı bez parçaları uygulayın ve bunları iyodopovidon içine batırın.
not: Kesi yerlerine lokal anestezik bir ilacın (lidokain veya bupivakain) uygulanmasını öneriyoruz.
- Ventilatörü 7 mL/kg tidal hacme ve 140 strok/dk.
ventilasyon hızına ayarlayın
not: Şu andan itibaren mikrocerrahi stereomikroskop altında çalışın.
- Cildi boğazın ortasında tutun ve küçük bir makas kullanarak kaudal / sefalik bir çizgiyi takip ederek 0,5 cm'lik bir kesi yapın. Tükürük bezinin loblarını ayırın, ardından gırtlak ve trakea görünene kadar sternohyoid kasın fasyasını kavisli diseksiyon forsepsleri ile nazikçe ayırın. Elastik bantlara bağlı ekartörlerle açıklığın kenarlarını sabitleyin.
not: Bu adımı kasları kesmeden yapın. Eğitimli bir operatör, trakeayı görselleştirmeden hayvanı ağız boşluğu yoluyla entübe edebilecek ve bu adımı isteğe bağlı hale getirecektir.
- Dili nazikçe yana doğru tutun. Forseps ile 16 G'lık bir kanülün körelmiş iç iğnesini soluk borusuna sokun. Boğaz kesisinden trakeaya doğru yerleştirmeyi görselleştirin.
- Kanülü ventilatöre bağlayın ve egzoz borusunu suya yerleştirerek doğru havalandırmayı sağlayın. Kabarcıkların varlığı doğru entübasyonu gösterir.
not: Operasyon sırasında dokuları ıslak tutmak için, boğaz kesisine %0.9 salin solüsyonu ve iyodopovidon ile ıslatılmış steril gazlı bez yerleştirin. İşlem sırasında nemi kontrol edin.
2. LAD Koroner Arterin Bağlanması
- Sol ön pençeyi koli bandından çıkarın ve fareyi dikkatlice sağ taraftaki dekübit konumuna getirin. Hayvan doğru pozisyonda olduğunda sol ön uzuvu sabitleyin.
- Sol pektoralis minör ve majör kaslar arasındaki çizgiyi belirleyin ve çizgiyi takip eden makasla 1 cm'lik eğik bir cilt kesisi yapın. Diseksiyon künt mikro makasla, pektoralis kaslarının fasyasını kesi yapmadan ayırın. Elastik bantlara bağlı ekartörlerle ayrılmış pektoralis kaslarını koruyun.
- Ventilatörü 3 cm H2O'luk pozitif ekspirasyon sonu basıncı (PEEP) ile ayarlayın.
- 3. ve 4. kaburgalar arasındaki 3. interkostal boşlukta künt forseps kullanarak göğüs boşluğunu açın. Kanama tehlikesi olduğundan internal torasik artere dokunmaktan kaçının. Kalbe veya akciğere dokunmayın. Göğüs kafesine, her bir kaburgaya bir tane olmak üzere iki ekartör uygulayın (Şekil 2A).
- Kavisli ince bir forseps ile perikardımı dikkatlice çıkarın ve kalbe ve akciğerlere zarar vermeden ayırın.
- Sol ön inen (LAD) koroner arteri bulun. LAD arter, sol kulak kepçesinin kenarından apekse doğru uzanan yüzeysel parlak kırmızı bir çizgi olarak görünür.
- Sol kulakçık yerinin 2 ila 3 mm altındaki LAD'ın altından 7-0 ipek sütür geçirmek için bir iğne tutucu kullanın. Kalp dokusunun yırtılmasını önlemek için ipeği yavaşça çekin. Bağı üç düğümle bağlayın. Sol ventrikülün sol alt kısmı, ligasyon üzerine anında soluklaşacaktır (Şekil 2B-E).
not: Ventriküler boşluğa çok derine inmemek veya çok yüzeysel kalmak önemlidir. Sahte olarak çalıştırılan hayvanlar için, dikiş ipeğini LAD'ın altına çekin ve doku yırtılmasını önleyerek yavaşça çıkarın.
- Kaburga ekartörlerini serbest bırakın, 3. kaburgayı forseps ile tutun ve 3. ve 4. kaburgaların altından 6-0 ipek sütür ile iki geçiş yapın.
Dikkat: Kalbi veya akciğeri delmeyin. Henüz düğümleri sıkmayın.
- Açıklığa üç damla 37 °C %0.9 tuzlu su çözeltisi koyun ve akciğerleri düzgün bir şekilde şişirmek için son kullanma egzoz borusunu 2 veya 3 solunum döngüsü boyunca kapatın. Dikişi sıkın ve iki atışla sabitleyin.
- Kasları tutan ekartörleri serbest bırakın ve doğru yerlerini almalarına yardımcı olun.
- Göğüs derisini 5-0 ipek dikişle iki dikişle kapatın ve iki atışla sabitleyin. Boğaz derisini 5-0 ipek dikişin bir dikişi ile kapatın ve iki atışla sabitleyin.
