$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. EHS Protokolü
- EHS protokolünden önceki gece, odaya alışmak için fareyi oda sıcaklığında (~25 °C, %≈30 bağıl nem) çevre odasına yerleştirin.
- Gece boyunca ortalama 30 sn aralıklarla sürekli çekirdek sıcaklığını (Tc) toplamak için bir veri toplama sistemi kullanın.
- EHS protokolünün sabahında, oda sıcaklığını artırmadan önce (yani 36–37,5 °C) farenin normal bir günlük sıcaklık aralığında veya altında olduğundan emin olun. Bu, farenin ateşi olmamasını ve bu süre zarfında aşırı stres yaşamamasını sağlar.
- Fare stabil hale geldiğinde ve normal dinlenme çekirdek sıcaklığı aralığına girdiğinde, yiyeceği ve suyu çıkarın ve hayvanı tartın. Hazne kapısını kapatın ve hazne sıcaklığını 37,5 °C hedefine ve %40-%50 bağıl neme veya istenen ortam sıcaklığı ve nemine yükseltin. Kalibre edilmiş bir sıcaklık ve nem monitörü ile oda sıcaklığını ve nemini doğrulayın.
- Protokol sırasında ışığı ve rahatsızlıkları minimumda tutmak için odayı bir karartma perdesi ile çevreleyin. Uzaktan IR aydınlatmalı kameralar aracılığıyla protokol sırasında fareyi sürekli olarak izleyin. Koşu tekerleğine yakın yerleştirilmiş sıcaklık ve nem monitörüne ikinci bir kamera odaklayın. Hayvanın yakınında doğru sıcaklık okumalarını sağlamak için çevre odası ayar noktası için kontrolörde herhangi bir ayarlama yapın.
- Hazne, sıcaklık monitöründeki ikinci kamera tarafından ölçülen hedef sıcaklığına ulaştığında (bu ~ 30 dakika sürebilir), hazne kapısını hızlı bir şekilde açın ve fareyi zorunlu çalışan tekerleğe yerleştirin.
- Zorunlu koşu tekerleği protokolünü 2,5 m/dk hızında başlatın ve fare 0.3 °C'lik bir Tc'ye ulaşana kadar hızı her 10 dakikada bir 41 m/dk artırın. Fare bu çekirdek sıcaklığına ulaştığında, belirgin bir bilinç kaybı, geriye doğru düşme veya bayılma ve koşmaya devam edememe veya tekerleğe tutunamama ile karakterize semptom sınırlamasına kadar hızın sabit kalmasına izin verin. Bu zaman noktasını, farenin fiziksel bir tepki belirtisi olmadan tekerlek üzerinde üç geriye doğru dönüşü olduğunda onaylayın. Alternatif olarak, protokolün ne zaman durdurulacağını belirlemek için yerel IACUC kurallarına uyan insancıl bir uç nokta belirleyin (örneğin, Tc ~ 43 °C olduğunda). Bu son nokta, esasen tüm farelerde semptom sınırlamasının biraz üzerindedir.
- Hızlı Soğutma protokolünü ( R ) gerçekleştirmek için, fare belirti sınırlamasına ulaştığında, tekerleği durdurun ve hemen zorunlu çalışan tekerlekten çıkarın. Fareyi tartın ve oda sıcaklığında iyileşmesi için ev kafesine geri koyun. Bu süre zarfında, haznenin hızlı bir şekilde soğumasını sağlamak için hazne kapısını açık bırakın ve inkübatör ayar noktasını oda sıcaklığına getirin. Bu prosedür %>99 uzun süreli sağkalım ile sonuçlanır.