$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Fare Hazırlığı
- Fareyi uyuşturun
- Bir şırıngada sodyum pentobarbital (50 mg / kg) hazırlayın.
- Fareyi (8 haftalık erkek C57BL/6) sol elinizle karnı yukarı bakacak ve başı kuyruğundan daha aşağıda olacak şekilde kavrayın. Karın cildini% 75 alkol ile dezenfekte edin.
- Şırıngayı sağ elinizde tutarak, karın beyaz çizgisini iğne ile cildin sağ tarafına hafifçe 3-5 mm delin. Şırınga iğnesinin ve cildin 45° açıda olduğundan emin olun, pentobarbitali karın boşluğuna yavaşça enjekte edin. Tıraştan sonra, farenin kesi bölgesinin etrafını dönüşümlü olarak 3 kez% 75 alkol ve Klorheksidin solüsyonu ile dezenfekte eder.
- Anestezi işleminin doğru bir refleks eksikliği nedeniyle başarılı olup olmadığını kontrol edin.
- Rodamin B izotiyosiyanat-dekstran'ı kaudal damara enjekte edin.
- Bir şırıngada 100 μL 10 mg / mL Rhodamine B izotiyosiyanat-dekstran hazırlayın.
- Farenin kuyruğunu% 75 alkolle silin.
- Kuyruğu sol elinizle tutun, şırıngayı iğne damara paralel olacak şekilde sağ elinizde tutun ve 100 μL boyayı enjekte edin.
- Enjeksiyondan sonra kanamayı pamuklu çubukla durdurun.
- Farenin karın kürkünü steril suyla ıslatılmış gazlı bezle ıslatın ve farenin karnını bir ustura kullanarak tıraş edin, kürk yönünde vuruşlar yapın. Tıraştan sonra, farenin kesi bölgesini dönüşümlü olarak 3 kez% 75 alkol ve Klorheksidin solüsyonu ile dezenfekte eder.
- %75 alkollü bir ısıtma pedini sildikten sonra, ısıtma pedini açın ve vücut sıcaklığını 37 °C'de tutmak için fareyi ısıtma yastığına sırt üstü yerleştirin.
2. Fare Karaciğerinin Vücut Organı Görüntüleme Çerçevesi ile Sabitlenmesi
NOT: Ticari organ görüntüleme çerçevesi henüz piyasaya sürülmemiştir.
- Temiz bir vantuzu sabit bir konuma yerleştirin.
- Bir organ görüntüleme armatürü takın (Şekil 1) ve ısıtma yastığını ve vantuzu %75 alkolle silin.
- Vantuzu (5 mm çapında) vakum pompası hortumuna bağlayın ve vakum pompasını açın.
- % 75 alkol ile sterilize edilmiş steril bir masada, farenin kesi bölgesini dönüşümlü olarak 3 kez% 75 alkol ve Klorheksidin solüsyonu ile dezenfekte eder, daha sonra farenin kesi bölgesini dönüşümlü olarak% 75 alkol ve Klorheksidin solüsyonu ile 3 kez dezenfekte eder, daha sonra farenin alt sternal sınırından 2 cm deri kesmek ve karaciğeri açığa çıkarmak için cerrahi makas kullanın.
- Fareyi ısıtma yastığı ile birlikte tutucu tabanına yerleştirin.
- Organ görüntüleme fikstürünü vantuz karaciğeri tutacak şekilde ayarlayın. Ardından, karaciğerin vantuza yapışması için emme için 30-35 kPa'lık bir negatif basınç kullanın (Şekil 2).
3. Çoklu Foton Lazer Tarama Mikroskobunu Ayarlama
- Çoklu foton mikroskobunu açın ve 60x/1.00 W objektifi seçin.
- Çerçeveyi ve fareyi objektif merceğin altına sabitleyin.
- Vantuzun merkezi olan tüm lensi kaplayabilecek bir damla normal salin ekleyin ve objektif lensi sadece normal saline dokunacak şekilde ayarlayın.
- Lazer yazılımını açmak ve anahtarı açmak için bilgisayar simgesine çift tıklayın. Ardından güç düğmesini ve deklanşörü 3 saniye basılı tutun.
- Dalga boyunu 800 nm'ye ayarlayın.
- Bilgisayarı kullanarak mikroskop işletim yazılımını başlatın.
- Edinme Ayarı için Laser 800'ü ayarlayın.
