$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.
1. Farelerin Hazırlanması ve Entübasyonu
- Genç C57B1 / J6 farelerini (20-25 g) bir koni tüpünde 0.5-1.0 L / dak% 100 O2 ile% 8 sevofluran soluyarak uyuşturun.
- Ayak parmağını kıstırma çekilme refleksini kullanarak anestezi derinliğini kontrol edin.
- Fareyi eğimli bir plaka üzerine dorsal yaslanacak şekilde yerleştirin ve orotrakeal entübasyona devam edin.
- Fareyi ısıtma yastığına hareket ettirin ve mekanik ventilasyonu başlatmak için orotrakeal tüpü hızlı bir şekilde ventilatöre bağlayın.
- Ventilatör parametrelerini 160 nefes/dk frekansa ve 10 mL/kg tidal hacme ayarlayın.
2. Ameliyata Hazırlık (Hem Bantlama hem de Bantlama Ameliyatları için)
- Tıraş olun ve tüy dökücü kremi boyun çizgisinden farelerin göğüs ortasına kadar uygulayın.
- Korneanın kurumasını önlemek için hayvanların gözlerine oftalmik jel sürün.
- Sırasıyla sıcaklık ve kan oksijenasyonunu ve kalp atış hızını izlemek için pençe veya kuyruğa bir rektal prob ve oksimetre yerleştirin.
NOT: Anestezi önemli hipotermiye neden olur, bu nedenle kalp atış hızında hızlı bir düşüşü önlemek için ameliyat sırasında normal vücut ısısını korumak önemlidir.
- Sevofluran ile anesteziyi koruyun (% 2.0-3.0). Ayak parmağını kıstırma refleksinin olmaması nedeniyle doğru anestezi seviyesini kontrol edin.
- Fareleri sağ lateral dekübite bir ısıtma yastığı üzerine yerleştirin ve ameliyat sırasında hayvanı doğru pozisyonda tutmak için uzuvları bir bantla manyetik fiksatör retraksiyon sistemine sabitleyin (Şekil 1, Şekil 2A).
- Fare göğsünü% 70 alkol ve ardından povidon-iyot çözeltisi ile dezenfekte edin.
>3. Asendan Aort Bantlama Ameliyatı
- Tek kullanımlık bir bıçakla, sol tarafta koltuk altı seviyesinin hemen altında küçük (~ 0,5 cm) bir cilt kesisi yapın ve cildi inceleyin.
- Kaburgalar görünür hale gelene kadar pektoralis kasını ve diğer kas katmanlarını nazikçe inceleyin ve ayırın. İnce forseps kullanın ve kasları kesmekten kaçının.
- Mikroskop altında, interkostal boşlukları tanımlayın ve ince forseps ile 2. ve 3. interkostal boşluk arasında küçük bir kesi açın.
- Göğüs ekartörünü yerleştirerek kaburgaları geri çekin (Şekil 1A).
- Çıkan aort görünür hale gelene kadar timik lobları nazikçe incelemek ve ayırmak için küçük forseps kullanın.
not: Kanama durumunda pamuk aplikatörleri kullanışlı olmalıdır. Önemli kanama durumunda (ör. meme arteri) ılık steril salin deri altına verilmelidir.
- Aortu nazikçe incelemek için küçük forseps kullanın.
NOT: Aort damarı, etrafında yağ veya başka yapışıklıklar olmadığında diseke edilecek şekilde kabul edilir ve küçük eğri bir forseps ile damarın etrafını kolayca sarmak mümkündür.
- Aort diseksiyonundan sonra, ligasyon yardımı ve kavisli forseps kullanarak aort etrafına 7-0 polipropilen ligatür yerleştirin (Şekil 1B).
- Körelmiş 26 G iğneyi aorta paralel olarak yerleştirin (uç fare kafasına doğru bakacak şekilde) (Şekil 1B). 20-25 g ağırlığındaki fareler için bu iğne, tekrarlanabilir %65-70 aort daralmasına neden olur.
- Aort ve 26 G iğne etrafında 2 adet forseps yardımıyla 2 adet gevşek düğüm atılmalıdır (Şekil 1B).
- 1. düğümü ve hemen ardından 2. düğümü sıkın. Daralmanın doğru konumlandırıldığını kısaca onaylayın ve aort kan akışını eski haline getirmek için iğneyi hızlı bir şekilde çıkarın. Son olarak, 3. bir düğüm (BA grubu) yapın.
- Timusu ve kasları başlangıç pozisyonlarına yeniden konumlandırın.
- Daraltma prosedürüne benzer sahte prosedürü uygulayın, ancak sütürü aort (SHAM grubu) çevresinde gevşek tutun.
- Dikişin uçlarını kesin ve göğüs ekartörünü çıkarın.
NOT: Kısa dikiş uçları aort basıncı ile düğüm gevşeme olasılığını artırabilirken, uzun uçlar dikiş ile sol atriyum arasında yapışıklıklar oluşabileceğinden çözülme işlemini daha riskli hale getirir.
- Göğüs duvarını 6-0 polipropilen sütür kullanarak basit, kesintili veya sürekli bir dikişle mümkün olan en düşük sayıda dikişle kapatın. Akciğerleri yeniden şişirmek için ventilatörün çıkışını 2 saniye boyunca sıkıştırarak akciğerler şişirilmiş olarak son göğüs düğümünü sıkın.
- Cildi 6-0 ipek/polipropilen sütür ile sürekli dikiş şeklinde kapatın.
NOT: Daha yeni bir ventilatör kullanılıyorsa, onu inspirasyonda duraklayacak şekilde programlamak mümkündür (Kurulum-Gelişmiş-Duraklatma-İlham)
4. Ameliyat Sonrası Bakım
- Cilt dikiş bölgesine povidon-iyot solüsyonu uygulayın.
- Uygun analjezi için, hayvan tamamen iyileşene kadar (genellikle ameliyattan 2-3 gün sonra) günde iki kez 0.1 mg / kg buprenorfin uygulayın.
- Ameliyat sırasında önemli kanama olması durumunda dehidrasyonu önlemek için intraperitoneal olarak steril salin enjekte edin.
- Anesteziyi kapatın (fareyi deentübe etmeden) ve hayvan refleksleri geri kazanana kadar bekleyin (bıyık hareketleri bir uyanış sinyalidir) ve kendiliğinden nefes almaya başlar.
- Trakeal kanülü çıkarın.
- Hayvanın 37 ° C'de bir kuluçka makinesinde iyileşmesine izin verin.
- Tamamen iyileştikten sonra hayvanı 12 saatlik bir aydınlık/karanlık döngü odasına geri koyun.
5. Aort Bantlama Ameliyatı
- Yedi hafta sonra, BA hayvanlarının yarısında aortun dağılmasını gerçekleştirin.
- Yukarıda belirtilen 1.1 ila 2.6 arasındaki tüm adımları tekrarlayın.
- Daralması görünür hale gelene kadar aort etrafındaki dokuları, yapışıklıkları ve fibrozu nazikçe inceleyin.
- Aortu dikkatlice inceleyin ve dikişi aorttan ayırın. Sütürü açılı tek problu yaylı makasla kesin (Şekil 2B).
- Mümkün olan en az sayıda dikiş kullanılarak basit bir kesintili veya sürekli dikiş ile 6-0 polipropilen sütür kullanılarak göğüs duvarını kapatın.
NOT: Pnömotoraksı önlemek için akciğerler şişirildiğinde son göğüs dikişini sıkmaya çalışın.
- Cildi 6-0 ipek/polipropilen sütür ile sürekli dikiş şeklinde kapatın.
- Ameliyat sonrası tüm bakım prosedürlerini 4. adımda belirtildiği gibi gerçekleştirin.
