Prenatal Fare Embriyolarının Alınması: Hamile Fareden Embriyo Toplama Prosedürü

Özet

Kaynak: Yun, K. Metilen Mavisi Boya Enjeksiyonu ile İdrar Yolu Bileşke Tıkanıklığı Kusurlarının Değerlendirilmesi. J. Vis. Uzm.(2017)

Bu video, hamile bir fareden embriyoların alınmasını göstermektedir. Kurtarılan perinatal embriyolar, memeli gelişimini incelemek için model sistemler olarak kullanılabilir.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Prenatal Embriyoların Diseksiyonu

1. Diseksiyon makaslarını ve forsepsleri %70 etanol ile temizleyin.
2. E18.5 veya E19.5'te perinatal embriyoları toplamak için, önce CO₂ inhalasyonu kullanarak hamile farelere ötenazi yapın ve ardından etik yönergelere göre servikal çıkık gerçekleştirin.
   not: Hamile dişi fare genellikle E18.5'ten başlayarak doğum yapar, ancak daha büyük böbreklerin manipüle edilmesi daha kolaydır. Bu nedenle, doğuma daha yakın olan E19.5'teki böbrekler üzerinde bu analizi yapmak daha kolaydır. Ancak iki taraflı idrar yolu tıkanıklığı olan yavrular doğumdan sonra ölürler. Deneysel farelerin özelliklerine bağlı olarak, uygun bir toplama günü/saati ampirik olarak belirlenmelidir.
3. Ventral karın yüzeyine% 70 etanol püskürtün ve ardından diseksiyon makası ve forseps kullanarak karın boşluğunu ventral olarak açın.
4. Rahim boynuzlarının uçlarından diseksiyon makası ile keserek tüm rahmi kaldırın ve vücuttan ayırın.
5. Tüm uterusu bir petri kabında 1x PBS ile durulayın.
6. Uterusu diseksiyon makası ile segmental olarak kesin ve yumurta sarısı keselerindeki embriyoları ortaya çıkarmak için diseksiyon forseps ile plasental desiduayı çıkarın.
7. Önce yumurta sarısı kesesini çıkarın ve ardından perinatal embriyoları serbest bırakmak için amniyotik zarı diseksiyon forsepsleri ile çıkarın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Hassas Çalışma Makası	Roboz Cerrahi Alet A.Ş.	RS-6702
Mikro Diseksiyon Forseps	Roboz Cerrahi Alet A.Ş.	RS-5135
Dumont cımbız; Desen #5	Roboz Cerrahi Alet A.Ş.	RS-5045
Kalite Biyolojik A.Ş. NORMAL TUZLU SU - 500ML	Balıkçı Bilimsel	50-983-204

Serisi Serisi Serisi