Yenidoğan Fare Yumurtalık İzolasyonu: Yenidoğan Fare Modelinden Yumurtalık Çifti Toplamak İçin Cerrahi Bir İşlem

Özet

Kaynak: et al. Morgan, S. Fare Yumurtalıklarının ve Yumurtalık Foliküllerinin Kültürü ve Ko-Kültürü. J. Vis. Uzm. (2015).

Bu videoda, yumurtalıkları yenidoğan bir fareden izole etmek için uygulanan cerrahi bir prosedürü anlatıyoruz.

Protokol

Hayvan modellerini içeren tüm prosedürler, yerel kurumsal hayvan bakım komitesi ve JoVE veteriner inceleme kurulu tarafından gözden geçirilmiştir.

1. Neonatal Over Diseksiyonu ve Kültürü

1. Her steril cam embriyo kabına 1 mL diseksiyon ortamı yerleştirin (3 mg / mL BSA'yı Leibowitz L15 ortamında çözün ve 0.2 μm gözenek, 25 mm çapında bir filtreden filtreyle sterilize edin).
2. Doğum sonrası 0. ve 5. günler arasında yaşlanan yenidoğan fare yavruları, kafa kesme ile itlaf edilir.
3. Bir çift ince diseksiyon forseps kullanarak karın duvarını kaplayan cildi kavrayın ve ciltte ve vücut duvarında büyük bir kesi yapın. Kesiyonu, tüm karın açıkta kalacak şekilde çekerek açın. Mesane genellikle bu aşamada tıkanır ve diseksiyonu kolaylaştırmak için delinebilir.
4. Saatçi forsepslerini kullanarak bağırsakları yoldan çekin. Her iki tarafta mesaneden böbreğe kadar uterus boynuzlarını takip edin. Yumurtalık, rahmin üst kısmında böbreğin hemen altında bulunur ve diseksiyon mikroskobu altında bulut benzeri bir yapı olarak görünecektir.
5. Yumurtalığı saatçi forseps ile nazikçe kavrayın ve rahme olan bağını kesmek için makas kullanın. Yumurtalık çiftini önceden ısıtılmış diseksiyon ortamı içeren embriyo tabaklarına aktarın.
6. Isıtılmış bir sahnede (37 ° C) bir diseksiyon mikroskobu altında yumurtalıkların ince diseksiyonunu gerçekleştirin. Sadece yumurtalık kalana kadar bursal kesesi ve fallop tüpü de dahil olmak üzere fazla materyali kesmek için insülin iğneleri kullanın.
7. Her yumurtalığı, ince çekilmiş kavisli bir cam pipet kullanarak bir kültür plakasının kuyusuna aktarın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
Leibowitz L15	Canlandırıcı	11415049
αMEM	Canlandırıcı	22571020	Sodyum bikarbonat tamponlu olarak tedarik edilir (2.200 mg / L)
Sığır serum albümini	Sigma Aldrich	A9418	Diseksiyon ortamı için
Sığır serum albümini	Sigma Aldrich	A3311	Kültür ortamı için
Sığır serum albümini	Sigma Aldrich	A2153	Cam pipetleri kaplamak için
Fsh	Merck Serono	Gonal F	Toplu test genellikle gereklidir. αMEM'de 1IU / 10μL'lik stok çözeltisini hazırlayın ve -20 ° C'de saklayın
Şırınga filtreleri (25 mm, 0,2 μm)	Greiner	16532 BİN	Daha büyük (>5 mL) hacimlerde ortamı filtrelemek için selüloz asetat filtresi.
Steril tüpler	Greiner	187261
24 oyuklu plaka	Greiner	662160
İnsülin iğneleri	BD tıbbi malzemeler	037-7606	0,33 mm (29 G) + 1 mL
Cam embriyo yemekleri	VWR (VWR)	720-0579	Sterilize edin, ardından kullanmadan önce ısıtın
Cam pipetler	Balıkçı Bilimsel	10209381	Kullanmadan önce BSA kaplı
Akupunktur iğneleri	Acumedic Ltd	30 mm x 0,25 Tip C
Formalin çözeltisi, nötr tamponlu, %10	Sigma Aldrich	HT5014-120 milyon
Whatman nükleopore zarları	Camlab Laboratuvarı	WN/110414	Parlak yüzey yukarı, polikarbonat, 13 mm çap, 8,0 μm gözenek boyutu kullanın

· Serisi · Serisi · Serisi ·