Adacık Transplantasyonunda Murin Modeli: Pankreas Adacıklarının Portal Ven İçine İnfüzyonu ve Postoperatif Kanamanın Önlenmesi İçin Cerrahi Bir Yöntem

Özet

Kaynak: Gou, W. et al. Farelerde İntrahepatik Adacık Nakli Sırasında İnfüzyon Sonrası Portal Ven Kanamasının En Aza İndirilmesi. J. Vis. Uzm. (2021)

Bu videoda, pankreas adacık hücrelerini hepatik portal ven içine infüze etmek için bir prosedürü ve ardından kanamayı başarılı bir şekilde önlemek için jel köpük uygulamasını açıklıyoruz. Postoperatif kanama, adacık nakli sırasında sık görülen yüksek mortalite nedenidir.

Protokol

1. Adacık nakli

1. Fareyi genel anestezi altında% 2 izofluran ile indükleyin ve koruyun. Hayvanın uygun şekilde uyuşturulmasını sağlamak için pedal reflekslerinin eksikliğini kontrol edin.
2. Farenin karın bölgesindeki kürkü tıraş edin ve çıkarın.
3. Ameliyat öncesi tek bir Buprenorfin dozu (0.1 mg / kg ip) uygulayın.
4. Cerrahi alanı %2 iyot ve %75 alkolden oluşan üç alternatif mendille dezenfekte edin.
5. 1-1,5 cm'lik bir kesi oluşturmak için mikro makasla laparotomi yapın.
6. Periton boşluğunu bir ekartör ile açın. Aşağıda ayrıntılı olarak açıklandığı gibi A veya B yöntemini takip edin.

Yöntem A: (jel köpük ile kanamayı durdurun, Şekil 1A)

1. Fare hazırlığı
   1. Kesiğin etrafına steril bir gazlı bez yerleştirin.
   2. Bir forseps kullanarak bağırsağı nazikçe dışarı çekin ve gazlı bez üzerinde tutun.
   3. Portal veni konumuna göre tanımlayın ve iyi bir şekilde ortaya çıkarın.
   4. Tüm ameliyat boyunca bağırsağı ılık tuzlu suyla ıslak bir gazlı bezle örtün.
2. Adacığı önceden yüklenmiş insülin şırınga iğnesini duodenum yakınındaki portal venden geçirin (Şekil 1B). Bunu yapmak için, iğneyi delik (eğim) aşağı bakacak şekilde tutun ve duvardan geçmeden önce açılış yüzeyinin açısını portal damar duvarına paralel olarak konumlandırın.
   1. Önce adacıkları karıştırmak için şırıngaya biraz kan (20-50 μL) çekmek için pistonu çekin.
   2. Daldırmayı tekrar tekrar çekip iterken adacıkları portal damara yavaşça infüze edin.
   3. Enjeksiyon bölgesini kaplamak için bir parça jel köpük (yaklaşık 0,5 cm x 0,5 cm boyutunda) yerleştirin.
   4. İğneyi portal damardan çekerken jel köpüğü pamuklu bir uçla aşağı doğru bastırın.
   5. Aktif kanama olmadığını doğrulamak için jele yaklaşık 2 dakika basmaya devam edin.
   6. Jel köpüğün portal damarı iyi bir şekilde kapladığından emin olmak için pamuğun ucunu jel köpüğün üzerinden ve uzamasından yuvarlayın.

Yöntem B: (yağ yastığı ile kanamayı durdurun, Şekil 1C)

1. Portal damarı iyice ortaya çıkarın.
   1. Açıkta kalan portal damarı hem sol hem de sağ taraftan tutmak için iki pamuklu uç kullanın.
   2. Duodenum ve portal ven arasındaki yağ dokusu pedini tanımlayın.
   3. İğneyi portal vene sokmadan önce yağ yastığına nüfuz edin (Şekil 1D).
   4. Yukarıda Yöntem A'da açıklanan benzer prosedürü izleyerek adacıkları infüze edin.
   5. Pamuklu bir uçla yağın üzerine bastırırken iğneyi dışarı çekin.
   6. İğneyi çıkardıktan sonra 1 dakika boyunca yağ yastığına bastırmaya devam edin.
2. Portal venden kanama olmadığını onayladıktan sonra, bağırsağı nazikçe orijinal pozisyonunda periton boşluğuna geri koyun.
3. Kapatmadan önce karın boşluğunda 0,5 mL ılık tuzlu su (36-37 °C) bırakın.
   not: Sıcak tuzlu su, ameliyat sonrası bağırsak hareketini ve iyileşmesini kolaylaştırır ve bağırsak nekrozunu önler.
4. Kas tabakasını 5-0 dikişle kapatın.
5. Cilt tabakasını 4-0 dikiş ile kapatın.
6. Anesteziden tamamen kurtulana kadar fareyi bir ısıtma yastığı üzerinde temiz bir kafese yerleştirin.
7. Her 12 saatte bir analjezik (ör., buprenorfin 0.1 mg / kg ip) ve ameliyat sonrası 48 saat boyunca ek ısı sağlamaya devam edin.
   NOT: Adacık nakli işleminin tamamlanması yaklaşık 15-20 dakika sürer.

Sonuçlar

Şekil 1: İntrahepatik adacık nakli prosedürlerinin gösterimi.(A, C). Yöntem A ve Yöntem B'de kullanılan temel adımların şemaları (B, D). Adacıklar direkt olarak portal ven (C) veya indirekt olarak yağ pat (D) yoluyla enjekte edildi.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi

Ad	Şirket	Katalog numarası	Yorumlar
% 10 Nötr tamponlu formalin v / v	Balıkçı Bilimsel	23426796
1 mL İğneli Şırınga	Ahs	AH01T Serisi
20 mL Şırınga	Bd	301031
25G x 5/8" hipodermik iğneler	Bd	305122
Alkol hazırlama pedleri, steril	Balıkçı Bilimsel	22-363-750
Hayvan Anestezi sistemi	VetEquip, Inc.	ve Tic. A.Ş. 901806
Buprenorfin hidroklorür, enjeksiyon	Par Steril Ürünler LLC	NDC 42023-179-05
Etanol mutlak (200 kanıt), moleküler biyoloji sınıfı	Balıkçı Bilimsel	BP2818500
Ekstra ince Mikro Diseksiyon makası 4 "düz keskin	Roboz Cerrahi Alet A.Ş.	RS-5882
Jel köpük (emilebilir jelatin sünger USP)	Pharmacia & Upjohn Şirketi	34201
Graefe forseps 4" ekstra hassas uç	Roboz Cerrahi Alet A.Ş.	RS-5136
Isıtmalı ped	Amazon	B07HMKMBKM
Hegar-Baumgartner İğne Tutucu 5.25"	Roboz Cerrahi Alet A.Ş.	RS-7850
27 gauge iğneli insülin şırıngası	Bd	879588
İyot hazırlama pedleri	Balıkçı Bilimsel	19-027048
İzofluran	Piramal Yoğun Bakım	NDC 66794-017-25
Polipropilen Sütür 4-0	Med-Vet Uluslararası	MV-8683
Polipropilen Sütür 5-0	Med-Vet Uluslararası	MV-8661
Sodyum klorür, %0.9 intravenöz çözelti	VWR (VWR)	2B1322Q
Cerrahi örtü, steril	Med-Vet Uluslararası	DR1826

Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi Serisi